上海交通大学学报（农业科学版）
上海交通大學學報（農業科學版）
상해교통대학학보（농업과학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE)
2011年
1期
68-74
,共7页
胡晓璐%沈新迁%傅科鹤%顾振芳%陈云鹏
鬍曉璐%瀋新遷%傅科鶴%顧振芳%陳雲鵬
호효로%침신천%부과학%고진방%진운붕
短小芽孢杆菌%突变%Tn5转座子%电击转化
短小芽孢桿菌%突變%Tn5轉座子%電擊轉化
단소아포간균%돌변%Tn5전좌자%전격전화
Tn5转座子及其衍生载体被广泛应用于革兰氏阴性菌的基因功能研究,但尚未见有利用Tn5转座子导入革兰氏阳性菌短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)DX01菌株的报道.本研究通过构建Tn5转座载体,对短小芽孢杆菌DX01菌株进行了Tn5转座插入诱变,获得了大量的突变株.同时,考察了感受态细胞培养浓度、电击电压、电击缓冲液及复苏培养基的选择等对DX01电转化效果的影响,建立了实验条件下的最佳电转条件.从1109个转化子中随机抽取20个继代培养15代后,进行了稳定性分析;对转化子的PCR及Southern blot分析证实Tn5已随机插入到DX01基因组中.
Tn5轉座子及其衍生載體被廣汎應用于革蘭氏陰性菌的基因功能研究,但尚未見有利用Tn5轉座子導入革蘭氏暘性菌短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)DX01菌株的報道.本研究通過構建Tn5轉座載體,對短小芽孢桿菌DX01菌株進行瞭Tn5轉座插入誘變,穫得瞭大量的突變株.同時,攷察瞭感受態細胞培養濃度、電擊電壓、電擊緩遲液及複囌培養基的選擇等對DX01電轉化效果的影響,建立瞭實驗條件下的最佳電轉條件.從1109箇轉化子中隨機抽取20箇繼代培養15代後,進行瞭穩定性分析;對轉化子的PCR及Southern blot分析證實Tn5已隨機插入到DX01基因組中.
Tn5전좌자급기연생재체피엄범응용우혁란씨음성균적기인공능연구,단상미견유이용Tn5전좌자도입혁란씨양성균단소아포간균(Bacillus pumilus)DX01균주적보도.본연구통과구건Tn5전좌재체,대단소아포간균DX01균주진행료Tn5전좌삽입유변,획득료대량적돌변주.동시,고찰료감수태세포배양농도、전격전압、전격완충액급복소배양기적선택등대DX01전전화효과적영향,건립료실험조건하적최가전전조건.종1109개전화자중수궤추취20개계대배양15대후,진행료은정성분석;대전화자적PCR급Southern blot분석증실Tn5이수궤삽입도DX01기인조중.
