中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2011年
4期
463-466
,共4页
郑卫东%张太松%陈冬%葛艳芬%林婷%胡斌
鄭衛東%張太鬆%陳鼕%葛豔芬%林婷%鬍斌
정위동%장태송%진동%갈염분%림정%호빈
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶%基因突变%反向斑点杂交法(RDB)
葡萄糖-6-燐痠脫氫酶%基因突變%反嚮斑點雜交法(RDB)
포도당-6-린산탈경매%기인돌변%반향반점잡교법(RDB)
[目的]探讨膜反向斑点杂交法在广东人G6PD基因6种常见突变同步检测中的应用.[方法]用高铁血红蛋白还原试验和G6PD/6-PGD酶活性比值法进行G6PD缺乏症筛查.应用多重PCR方法扩增G6PD基因目的片段.用Premier Primer6.0软件设计和优化针对广东人常见6种G6PD基因突变型的特异性寡核甘酸探针,用乙基-3-二甲氨基丙碳二亚胺(EDC)法处理尼龙膜并固定探针,制成G6PD基因突变检测用膜条.多重PCR扩增产物与固定在膜条上寡核苷酸探针进行杂交,通过显色反应判读结果.以C6PD基因测序为金标准,对膜反向斑点杂交法进行评价.[结果]26例标本中膜反向斑点杂交法检测结果:95 A→G突变型5例,1024C→T突变型3例,1376 G→T突变型8例,1388G→A突变型7例,392 G→T突变型l例,未发现1311C→T突变型,有两例检测为阴性.膜反向斑点杂交法未能测出的2例标本经基因测序证实存在392G→T突变,其余24例膜反向斑点法与基因测序法的结果完全一致,符合率为92.3％(24/26).[结论]在优化探针设计和杂交条件前提下,膜反向斑点杂交法可用于广东人G6PD基因6种常见突变型的同步检测.
[目的]探討膜反嚮斑點雜交法在廣東人G6PD基因6種常見突變同步檢測中的應用.[方法]用高鐵血紅蛋白還原試驗和G6PD/6-PGD酶活性比值法進行G6PD缺乏癥篩查.應用多重PCR方法擴增G6PD基因目的片段.用Premier Primer6.0軟件設計和優化針對廣東人常見6種G6PD基因突變型的特異性寡覈甘痠探針,用乙基-3-二甲氨基丙碳二亞胺(EDC)法處理尼龍膜併固定探針,製成G6PD基因突變檢測用膜條.多重PCR擴增產物與固定在膜條上寡覈苷痠探針進行雜交,通過顯色反應判讀結果.以C6PD基因測序為金標準,對膜反嚮斑點雜交法進行評價.[結果]26例標本中膜反嚮斑點雜交法檢測結果:95 A→G突變型5例,1024C→T突變型3例,1376 G→T突變型8例,1388G→A突變型7例,392 G→T突變型l例,未髮現1311C→T突變型,有兩例檢測為陰性.膜反嚮斑點雜交法未能測齣的2例標本經基因測序證實存在392G→T突變,其餘24例膜反嚮斑點法與基因測序法的結果完全一緻,符閤率為92.3％(24/26).[結論]在優化探針設計和雜交條件前提下,膜反嚮斑點雜交法可用于廣東人G6PD基因6種常見突變型的同步檢測.
[목적]탐토막반향반점잡교법재엄동인G6PD기인6충상견돌변동보검측중적응용.[방법]용고철혈홍단백환원시험화G6PD/6-PGD매활성비치법진행G6PD결핍증사사.응용다중PCR방법확증G6PD기인목적편단.용Premier Primer6.0연건설계화우화침대엄동인상견6충G6PD기인돌변형적특이성과핵감산탐침,용을기-3-이갑안기병탄이아알(EDC)법처리니룡막병고정탐침,제성G6PD기인돌변검측용막조.다중PCR확증산물여고정재막조상과핵감산탐침진행잡교,통과현색반응판독결과.이C6PD기인측서위금표준,대막반향반점잡교법진행평개.[결과]26례표본중막반향반점잡교법검측결과:95 A→G돌변형5례,1024C→T돌변형3례,1376 G→T돌변형8례,1388G→A돌변형7례,392 G→T돌변형l례,미발현1311C→T돌변형,유량례검측위음성.막반향반점잡교법미능측출적2례표본경기인측서증실존재392G→T돌변,기여24례막반향반점법여기인측서법적결과완전일치,부합솔위92.3％(24/26).[결론]재우화탐침설계화잡교조건전제하,막반향반점잡교법가용우엄동인G6PD기인6충상견돌변형적동보검측.
