天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2001年
12期
732-735
,共4页
何红鹏%方佩华%吕枚%姬永丽
何紅鵬%方珮華%呂枚%姬永麗
하홍붕%방패화%려매%희영려
碘化物过氧化物酶%甲状腺%基因表达
碘化物過氧化物酶%甲狀腺%基因錶達
전화물과양화물매%갑상선%기인표체
目的:探索在E.coli BL21中表达hTPO抗原决定簇片段(AA568～AA874).方法:将hTPO抗原决定簇基因(1 702～2 622,编号相对于起始密码子)连接到表达型载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒.然后转化E.coli Bl21,IPTG诱导表达.表达产物采用亲和层析方法纯化,SDS-PAGE法测定其分子质量,ELISA法鉴定免疫学活性,考马斯亮蓝染色法定量.结果:成功地表达了hTPO抗原决定簇基因.纯化的GST-hTPO融合蛋白分子质量为61.4 ku,hTPO片段分子质量为37.6 ku.以此作为抗原按ELISA法分别与TPOAb阳性血清或阴性血清反应,结果表明GST-hTPO及hTPO片段均与TPOAb特异性结合.纯化的GST-hTPO产量为10 mg/L培养基;hTPO片段产量为1.2 mg/L培养基.结论:利用基因工程技术可获得高纯度的GST-hTPO融合蛋白及hTPO片段,产物具有良好的免疫学活性.
目的:探索在E.coli BL21中錶達hTPO抗原決定簇片段(AA568～AA874).方法:將hTPO抗原決定簇基因(1 702～2 622,編號相對于起始密碼子)連接到錶達型載體pGEX-4T-3,構建重組錶達質粒.然後轉化E.coli Bl21,IPTG誘導錶達.錶達產物採用親和層析方法純化,SDS-PAGE法測定其分子質量,ELISA法鑒定免疫學活性,攷馬斯亮藍染色法定量.結果:成功地錶達瞭hTPO抗原決定簇基因.純化的GST-hTPO融閤蛋白分子質量為61.4 ku,hTPO片段分子質量為37.6 ku.以此作為抗原按ELISA法分彆與TPOAb暘性血清或陰性血清反應,結果錶明GST-hTPO及hTPO片段均與TPOAb特異性結閤.純化的GST-hTPO產量為10 mg/L培養基;hTPO片段產量為1.2 mg/L培養基.結論:利用基因工程技術可穫得高純度的GST-hTPO融閤蛋白及hTPO片段,產物具有良好的免疫學活性.
목적:탐색재E.coli BL21중표체hTPO항원결정족편단(AA568～AA874).방법:장hTPO항원결정족기인(1 702～2 622,편호상대우기시밀마자)련접도표체형재체pGEX-4T-3,구건중조표체질립.연후전화E.coli Bl21,IPTG유도표체.표체산물채용친화층석방법순화,SDS-PAGE법측정기분자질량,ELISA법감정면역학활성,고마사량람염색법정량.결과:성공지표체료hTPO항원결정족기인.순화적GST-hTPO융합단백분자질량위61.4 ku,hTPO편단분자질량위37.6 ku.이차작위항원안ELISA법분별여TPOAb양성혈청혹음성혈청반응,결과표명GST-hTPO급hTPO편단균여TPOAb특이성결합.순화적GST-hTPO산량위10 mg/L배양기;hTPO편단산량위1.2 mg/L배양기.결론:이용기인공정기술가획득고순도적GST-hTPO융합단백급hTPO편단,산물구유량호적면역학활성.
