具有潮霉素B抗性的NIH3T3细胞饲养层的制备
구유조매소B항성적NIH3T3세포사양층적제비
Establishment of a Hygromycin B Resistant NIH3T3 Cell Line as Feeder Layer
  • 万方数据
    实验动物与比较医学 실험동물여비교의학
    LABORATORY ANIMAL AND COMPARATIVE MEDICINE
    2005年 3期 131-135 ,共5页

    张梅英%李华%董婉维%杨葳%秦英%汪瑛%周生来%于洋%王惟%王太一%王禄增

    장매영%리화%동완유%양위%진영%왕영%주생래%우양%왕유%왕태일%왕록증

    NIH3T3细胞%潮霉素B磷酸转移酶基因%转染%潮霉素B抗性%ES细胞 NIH3T3細胞%潮黴素B燐痠轉移酶基因%轉染%潮黴素B抗性%ES細胞
    NIH3T3세포%조매소B린산전이매기인%전염%조매소B항성%ES세포
    目的建立具有潮霉素B(hygromycin B)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE2-human-Ins)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层.方法通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因(hyg)的质粒pHyg导入NIH3T3细胞中,利用潮霉素B的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR和Southern blot鉴定.结果经300μg/ml的潮霉素B压力筛选后,获得了抗性细胞克隆.抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出相应的核苷酸片段,Southern blot鉴定结果表明潮霉素基因片段已整合入潮霉素抗性NIH3T3细胞.结论本实验通过脂质体介导的方法成功地培育了潮霉素B抗性的NIH3T3细胞,为进行目的基因(pTRE2-human-Ins)转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础.
    목적건립구유조매소B(hygromycin B)항성적3T3세포계,용우전염목적기인(pTRE2-human-Ins)적ES양성세포극륭사선적사양층.방법통과지질체전염적방법,장함유조매소B린산전이매기인(hyg)적질립pHyg도입NIH3T3세포중,이용조매소B적약물선택특성,대전염세포진행압력사선,병대기진행PCR화Southern blot감정.결과경300μg/ml적조매소B압력사선후,획득료항성세포극륭.항성NIH3T3세포적형태화생장속도여정상NIH3T3세포몰유차이,특이성핵감산인물검측항성세포기인조DNA,가이확증출상응적핵감산편단,Southern blot감정결과표명조매소기인편단이정합입조매소항성NIH3T3세포.결론본실험통과지질체개도적방법성공지배육료조매소B항성적NIH3T3세포,위진행목적기인(pTRE2-human-Ins)전염ES세포적양성세포극륭사선타하료기출.
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