上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2007年
1期
85-87
,共3页
胰十二指肠同源盒%基因克隆%真核表达载体%转染
胰十二指腸同源盒%基因剋隆%真覈錶達載體%轉染
이십이지장동원합%기인극륭%진핵표체재체%전염
目的 构建人胰十二指肠同源盒(PDX-1)基因的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达.方法 以人胰岛细胞瘤cDNA为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增PDX-1基因编码区的全部序列,克隆入真核细胞表达载体pcDNA3.1中,经限制性内切酶双酶切及DNA序列分析鉴定目的基因.序列正确的重组质粒用脂质体转染NIH3T3细胞,Western blot观察基因表达情况.结果 PCR扩增的特异性片段长度为852 bp,以此构建的重组质粒pcDNA3.1-PDX-1, 经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后显示5.5 kb和 850 bp左右的两条片段,测序结果与GenBank中的人PDX-1基因cDNA(GenBank 序列号NM_000209)序列一致.证明PDX-1基因已成功克隆到了真核细胞表达载体pcDNA3.1 中.Western blot证实pcDNA3.1-PDX-1转染NIH3T3细胞24 h后有PDX-1的表达.结论 成功构建了pcDNA3.1-PDX-1重组真核表达载体,并在NIH3T3细胞中表达.
目的 構建人胰十二指腸同源盒(PDX-1)基因的真覈錶達載體,觀察其在NIH3T3細胞中的錶達.方法 以人胰島細胞瘤cDNA為模闆,採用聚閤酶鏈式反應(PCR)擴增PDX-1基因編碼區的全部序列,剋隆入真覈細胞錶達載體pcDNA3.1中,經限製性內切酶雙酶切及DNA序列分析鑒定目的基因.序列正確的重組質粒用脂質體轉染NIH3T3細胞,Western blot觀察基因錶達情況.結果 PCR擴增的特異性片段長度為852 bp,以此構建的重組質粒pcDNA3.1-PDX-1, 經BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切後顯示5.5 kb和 850 bp左右的兩條片段,測序結果與GenBank中的人PDX-1基因cDNA(GenBank 序列號NM_000209)序列一緻.證明PDX-1基因已成功剋隆到瞭真覈細胞錶達載體pcDNA3.1 中.Western blot證實pcDNA3.1-PDX-1轉染NIH3T3細胞24 h後有PDX-1的錶達.結論 成功構建瞭pcDNA3.1-PDX-1重組真覈錶達載體,併在NIH3T3細胞中錶達.
목적 구건인이십이지장동원합(PDX-1)기인적진핵표체재체,관찰기재NIH3T3세포중적표체.방법 이인이도세포류cDNA위모판,채용취합매련식반응(PCR)확증PDX-1기인편마구적전부서렬,극륭입진핵세포표체재체pcDNA3.1중,경한제성내절매쌍매절급DNA서렬분석감정목적기인.서렬정학적중조질립용지질체전염NIH3T3세포,Western blot관찰기인표체정황.결과 PCR확증적특이성편단장도위852 bp,이차구건적중조질립pcDNA3.1-PDX-1, 경BamHⅠ화EcoRⅠ쌍매절후현시5.5 kb화 850 bp좌우적량조편단,측서결과여GenBank중적인PDX-1기인cDNA(GenBank 서렬호NM_000209)서렬일치.증명PDX-1기인이성공극륭도료진핵세포표체재체pcDNA3.1 중.Western blot증실pcDNA3.1-PDX-1전염NIH3T3세포24 h후유PDX-1적표체.결론 성공구건료pcDNA3.1-PDX-1중조진핵표체재체,병재NIH3T3세포중표체.
