基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2008年
7期
707-712
,共6页
环氧化酶2%A549细胞%D-SiRNAs%RNA干扰
環氧化酶2%A549細胞%D-SiRNAs%RNA榦擾
배양화매2%A549세포%D-SiRNAs%RNA간우
目的 长片段双链COX-2 RNA(dsRNAs)在体外经Dicer酶消化获得小RNA(D-siRNAs)抑制A549细胞COX-2的表达.方法 (1)IL-1β5 g/L干预A549细胞,Western blot法观察其COX-2蛋白表达的时间依赖性.(2)Trizol法抽提A549细胞总RNA,RT-PGR扩增COX-2基因.(3)设计两端带T7 promoter,SP6 promoter的COX-2 cDNA的PCR引物,通过PCR方法,获得两端带,T7及SP6 promoter的COX-2 DNA.(4)用RiboMAX Large Scale RNA Produc-tion Systems-SP6 and T7试剂盒体外将COX-2 DNA转录为RNA.(5)长片段COX-2 RNA经Dicer酶消化为小RNA(D-siRNAs).(6)用TransMessenger Transfection Reagent将D-siRNAs转染A549细胞.(7)COX-2 mRNA表达用RT-PCR检测,细胞培养上清液中PGE2含量用ELISA测定.结果 (1)IL-1β干预A549细胞9 haCOX-2表达到高峰.(2)在体外,长片段COX-2 dsRNAs经Dicer酶消化获得D-siRNAs.(3)D-siRNAs可有效抑制A549细胞COX-2的表达并降低PGE2的分泌.结论 长片段双链COX-2 RNA(dsRNAs)在体外经Dicer酶消化获得小RNA可有效抑制A549细胞COX-2的表达.
目的 長片段雙鏈COX-2 RNA(dsRNAs)在體外經Dicer酶消化穫得小RNA(D-siRNAs)抑製A549細胞COX-2的錶達.方法 (1)IL-1β5 g/L榦預A549細胞,Western blot法觀察其COX-2蛋白錶達的時間依賴性.(2)Trizol法抽提A549細胞總RNA,RT-PGR擴增COX-2基因.(3)設計兩耑帶T7 promoter,SP6 promoter的COX-2 cDNA的PCR引物,通過PCR方法,穫得兩耑帶,T7及SP6 promoter的COX-2 DNA.(4)用RiboMAX Large Scale RNA Produc-tion Systems-SP6 and T7試劑盒體外將COX-2 DNA轉錄為RNA.(5)長片段COX-2 RNA經Dicer酶消化為小RNA(D-siRNAs).(6)用TransMessenger Transfection Reagent將D-siRNAs轉染A549細胞.(7)COX-2 mRNA錶達用RT-PCR檢測,細胞培養上清液中PGE2含量用ELISA測定.結果 (1)IL-1β榦預A549細胞9 haCOX-2錶達到高峰.(2)在體外,長片段COX-2 dsRNAs經Dicer酶消化穫得D-siRNAs.(3)D-siRNAs可有效抑製A549細胞COX-2的錶達併降低PGE2的分泌.結論 長片段雙鏈COX-2 RNA(dsRNAs)在體外經Dicer酶消化穫得小RNA可有效抑製A549細胞COX-2的錶達.
목적 장편단쌍련COX-2 RNA(dsRNAs)재체외경Dicer매소화획득소RNA(D-siRNAs)억제A549세포COX-2적표체.방법 (1)IL-1β5 g/L간예A549세포,Western blot법관찰기COX-2단백표체적시간의뢰성.(2)Trizol법추제A549세포총RNA,RT-PGR확증COX-2기인.(3)설계량단대T7 promoter,SP6 promoter적COX-2 cDNA적PCR인물,통과PCR방법,획득량단대,T7급SP6 promoter적COX-2 DNA.(4)용RiboMAX Large Scale RNA Produc-tion Systems-SP6 and T7시제합체외장COX-2 DNA전록위RNA.(5)장편단COX-2 RNA경Dicer매소화위소RNA(D-siRNAs).(6)용TransMessenger Transfection Reagent장D-siRNAs전염A549세포.(7)COX-2 mRNA표체용RT-PCR검측,세포배양상청액중PGE2함량용ELISA측정.결과 (1)IL-1β간예A549세포9 haCOX-2표체도고봉.(2)재체외,장편단COX-2 dsRNAs경Dicer매소화획득D-siRNAs.(3)D-siRNAs가유효억제A549세포COX-2적표체병강저PGE2적분비.결론 장편단쌍련COX-2 RNA(dsRNAs)재체외경Dicer매소화획득소RNA가유효억제A549세포COX-2적표체.
