黑龙江畜牧兽医
黑龍江畜牧獸醫
흑룡강축목수의
HEILONGJIANG JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE AND VETERINARY MEDICINE
2008年
7期
14-17
,共4页
PRRSV%分子克隆%序列分析
PRRSV%分子剋隆%序列分析
PRRSV%분자극륭%서렬분석
为了弄清我国不同地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的来源及其遗传学背景,为疫苗学研究提供理论根据,在获得CH-1a株完整的基因组以后,从流行于我国山东(SD)和黑龙江大庆(DQ)地区疑似PRRS的猪体内分离到PRRSV,在Marc-145细胞上盲传5～6代,细胞出现明显病变以后收获病毒液,提纯并提取全病毒RNA,经过反转录、PCR扩增获得结构基因ORF 2～6的目的基因片段,然后与pMD-T载体连接,转化,得到阳性质粒后进行测序,并将其与CH-1a株进行比较分析,同时对这两个毒株的结构基因组的理化性质进行分析.结果表明:流行于我国山东和大庆地区的PRRSV结构基因ORF 2～6与CH-1a株核苷酸的同源性均在94%～99%之间,氨基酸的同源性也在90%以上,但从DQ和SD株结构基因编码的蛋白来看,这两个毒株与CH-1a株的结构基因所编码的蛋白在氨基酸组成以及等电点方面还有一定的差异,表明流行于我国的PRRSV毒株均属于美洲型.
為瞭弄清我國不同地區豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)的來源及其遺傳學揹景,為疫苗學研究提供理論根據,在穫得CH-1a株完整的基因組以後,從流行于我國山東(SD)和黑龍江大慶(DQ)地區疑似PRRS的豬體內分離到PRRSV,在Marc-145細胞上盲傳5～6代,細胞齣現明顯病變以後收穫病毒液,提純併提取全病毒RNA,經過反轉錄、PCR擴增穫得結構基因ORF 2～6的目的基因片段,然後與pMD-T載體連接,轉化,得到暘性質粒後進行測序,併將其與CH-1a株進行比較分析,同時對這兩箇毒株的結構基因組的理化性質進行分析.結果錶明:流行于我國山東和大慶地區的PRRSV結構基因ORF 2～6與CH-1a株覈苷痠的同源性均在94%～99%之間,氨基痠的同源性也在90%以上,但從DQ和SD株結構基因編碼的蛋白來看,這兩箇毒株與CH-1a株的結構基因所編碼的蛋白在氨基痠組成以及等電點方麵還有一定的差異,錶明流行于我國的PRRSV毒株均屬于美洲型.
위료롱청아국불동지구저번식여호흡종합정병독(PRRSV)적래원급기유전학배경,위역묘학연구제공이론근거,재획득CH-1a주완정적기인조이후,종류행우아국산동(SD)화흑룡강대경(DQ)지구의사PRRS적저체내분리도PRRSV,재Marc-145세포상맹전5～6대,세포출현명현병변이후수획병독액,제순병제취전병독RNA,경과반전록、PCR확증획득결구기인ORF 2～6적목적기인편단,연후여pMD-T재체련접,전화,득도양성질립후진행측서,병장기여CH-1a주진행비교분석,동시대저량개독주적결구기인조적이화성질진행분석.결과표명:류행우아국산동화대경지구적PRRSV결구기인ORF 2～6여CH-1a주핵감산적동원성균재94%～99%지간,안기산적동원성야재90%이상,단종DQ화SD주결구기인편마적단백래간,저량개독주여CH-1a주적결구기인소편마적단백재안기산조성이급등전점방면환유일정적차이,표명류행우아국적PRRSV독주균속우미주형.
