浙江工业大学学报
浙江工業大學學報
절강공업대학학보
Journal of Zhejiang University of Technology
2009年
4期
372-375
,共4页
碱性磷酸酶%E.coli BL21(DE3)%E.coli origami(DE3)%可溶性%活性
堿性燐痠酶%E.coli BL21(DE3)%E.coli origami(DE3)%可溶性%活性
감성린산매%E.coli BL21(DE3)%E.coli origami(DE3)%가용성%활성
以E.coli DH5a基因组为模板PCR扩增得到无信号肽的碱性磷酸酶基因片段,与胞内融合表达型T栽体连接得到重组质粒,转化表达宿主E.coli BL21(DE3)和E.coli origami(DE3),经0.1 mM IPTG诱导表达,超声破碎细胞后,SDS-PAGE分析可溶性,融合蛋白在E.coli origami(DE3)中的可溶蛋白含量比E.coli BL21(DE3)中高.融合蛋白的可溶部分经Ni2+螯合亲和纯化,纯化后E.coli origami(DE3)中蛋白活性比E.coli BL21(DE3)中明显提高,达到1 614.3U/mg蛋白.
以E.coli DH5a基因組為模闆PCR擴增得到無信號肽的堿性燐痠酶基因片段,與胞內融閤錶達型T栽體連接得到重組質粒,轉化錶達宿主E.coli BL21(DE3)和E.coli origami(DE3),經0.1 mM IPTG誘導錶達,超聲破碎細胞後,SDS-PAGE分析可溶性,融閤蛋白在E.coli origami(DE3)中的可溶蛋白含量比E.coli BL21(DE3)中高.融閤蛋白的可溶部分經Ni2+螯閤親和純化,純化後E.coli origami(DE3)中蛋白活性比E.coli BL21(DE3)中明顯提高,達到1 614.3U/mg蛋白.
이E.coli DH5a기인조위모판PCR확증득도무신호태적감성린산매기인편단,여포내융합표체형T재체련접득도중조질립,전화표체숙주E.coli BL21(DE3)화E.coli origami(DE3),경0.1 mM IPTG유도표체,초성파쇄세포후,SDS-PAGE분석가용성,융합단백재E.coli origami(DE3)중적가용단백함량비E.coli BL21(DE3)중고.융합단백적가용부분경Ni2+오합친화순화,순화후E.coli origami(DE3)중단백활성비E.coli BL21(DE3)중명현제고,체도1 614.3U/mg단백.
