基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2010年
6期
598-602
,共5页
师文娟%邵丁丁%钟翔%王恒
師文娟%邵丁丁%鐘翔%王恆
사문연%소정정%종상%왕항
CD74%杆状病毒%昆虫细胞%蛋白表达
CD74%桿狀病毒%昆蟲細胞%蛋白錶達
CD74%간상병독%곤충세포%단백표체
目的 建立应用昆虫杆状病毒表达系统表达人Ⅱ型CD74胞外端片段的技术平台.方法 运用分子克隆技术,分别将CD 74胞外端全长(73～232aa)和与MIF结合的核心区(109～192aa)片段置于表达载体pFastBacDual的PPH启动子下,重组质粒转入含有Bacmid的大肠杆菌DH10Bac后与病毒基因组重组,提取重组病毒杆粒基因组,转染Sf-21细胞系.用RT-PCR检测目的 基因mRNA,用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白的表达.结果 CD74胞外端全长(73～232 aa)可实现在昆虫细胞中的表达,目的 蛋白可被His标签抗体和CD74抗体识别;在细胞感染72 h、病毒接种滴度MOI为8时,目的 蛋白可实现最大表达量.CD74与MIF结合的核心区(109～192 aa)片段在mRNA可实现转录的情况下未实现目的 蛋白表达.结论 成功建立人Ⅱ型CD74胞外端全长在昆虫细胞Sf-21中的表达平台,并获得了目的 蛋白表达的优化条件.
目的 建立應用昆蟲桿狀病毒錶達繫統錶達人Ⅱ型CD74胞外耑片段的技術平檯.方法 運用分子剋隆技術,分彆將CD 74胞外耑全長(73～232aa)和與MIF結閤的覈心區(109～192aa)片段置于錶達載體pFastBacDual的PPH啟動子下,重組質粒轉入含有Bacmid的大腸桿菌DH10Bac後與病毒基因組重組,提取重組病毒桿粒基因組,轉染Sf-21細胞繫.用RT-PCR檢測目的 基因mRNA,用SDS-PAGE和Western blot分析重組蛋白的錶達.結果 CD74胞外耑全長(73～232 aa)可實現在昆蟲細胞中的錶達,目的 蛋白可被His標籤抗體和CD74抗體識彆;在細胞感染72 h、病毒接種滴度MOI為8時,目的 蛋白可實現最大錶達量.CD74與MIF結閤的覈心區(109～192 aa)片段在mRNA可實現轉錄的情況下未實現目的 蛋白錶達.結論 成功建立人Ⅱ型CD74胞外耑全長在昆蟲細胞Sf-21中的錶達平檯,併穫得瞭目的 蛋白錶達的優化條件.
목적 건립응용곤충간상병독표체계통표체인Ⅱ형CD74포외단편단적기술평태.방법 운용분자극륭기술,분별장CD 74포외단전장(73～232aa)화여MIF결합적핵심구(109～192aa)편단치우표체재체pFastBacDual적PPH계동자하,중조질립전입함유Bacmid적대장간균DH10Bac후여병독기인조중조,제취중조병독간립기인조,전염Sf-21세포계.용RT-PCR검측목적 기인mRNA,용SDS-PAGE화Western blot분석중조단백적표체.결과 CD74포외단전장(73～232 aa)가실현재곤충세포중적표체,목적 단백가피His표첨항체화CD74항체식별;재세포감염72 h、병독접충적도MOI위8시,목적 단백가실현최대표체량.CD74여MIF결합적핵심구(109～192 aa)편단재mRNA가실현전록적정황하미실현목적 단백표체.결론 성공건립인Ⅱ형CD74포외단전장재곤충세포Sf-21중적표체평태,병획득료목적 단백표체적우화조건.
