CAJ | 학술논문

目的:通过Gateway技术构建布鲁菌抗原表达载体,并筛选出高效可溶性表达载体.方法:以山羊布鲁菌16M株染色体DNA为模板,扩增4个布鲁菌抗原基因BMEI2002、BMEI1069、BMEI1483和BMEI0748,利用Gateway BP反应将基因克隆到入门载体pDONR201中,构建重组质粒,然后用Gateway LR反应将基因重组到3种表达载体(pDEST17、pHXGWA、pHGGWA)中,构建相应的重组表达质粒,将重组质粒转化大肠杆菌ER2566(DE3)并诱导表达,分析利用3个不同载体所表达蛋白的表达量及表达形式.结果:利用BP反应构建了4个基因的重组质粒,用LR反应将这些基因分别克隆到表达载体,构建得到了相应的表达载体;诱导表达后的可溶性分析显示,含6×His和TRX标签的pHXGWA所表达的蛋白在表达量和可溶性方面均优于pDEST17和pHGGWA.结论:通过Gateway技术实现了布鲁菌抗原的快速克隆,筛选到的pHXGWA可作为后续大规模克隆表达载体,为布鲁菌抗原的大规模克隆表达和保护性抗原的筛选奠定了基础.
목적:통과Gateway기술구건포로균항원표체재체,병사선출고효가용성표체재체.방법:이산양포로균16M주염색체DNA위모판,확증4개포로균항원기인BMEI2002、BMEI1069、BMEI1483화BMEI0748,이용Gateway BP반응장기인극륭도입문재체pDONR201중,구건중조질립,연후용Gateway LR반응장기인중조도3충표체재체(pDEST17、pHXGWA、pHGGWA)중,구건상응적중조표체질립,장중조질립전화대장간균ER2566(DE3)병유도표체,분석이용3개불동재체소표체단백적표체량급표체형식.결과:이용BP반응구건료4개기인적중조질립,용LR반응장저사기인분별극륭도표체재체,구건득도료상응적표체재체;유도표체후적가용성분석현시,함6×His화TRX표첨적pHXGWA소표체적단백재표체량화가용성방면균우우pDEST17화pHGGWA.결론:통과Gateway기술실현료포로균항원적쾌속극륭,사선도적pHXGWA가작위후속대규모극륭표체재체,위포로균항원적대규모극륭표체화보호성항원적사선전정료기출.