解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2010年
5期
679-685
,共7页
谢佳芯%袁建明%郭金萍%由振东%路长林%许家军
謝佳芯%袁建明%郭金萍%由振東%路長林%許傢軍
사가심%원건명%곽금평%유진동%로장림%허가군
羊膜上皮细胞%碱性成纤维细胞生长因子%慢病毒%基因转染%免疫荧光细胞化学%酶联免疫吸附法%大鼠
羊膜上皮細胞%堿性成纖維細胞生長因子%慢病毒%基因轉染%免疫熒光細胞化學%酶聯免疫吸附法%大鼠
양막상피세포%감성성섬유세포생장인자%만병독%기인전염%면역형광세포화학%매련면역흡부법%대서
目的 探讨以慢病毒作为载体,将带有分泌肽的人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因片段转入大鼠羊膜上皮细胞(AECs)中,构建能稳定表达并分泌bFGF多肽的细胞载体. 方法 取妊娠晚期SD大鼠的羊膜组织进行AECs原代培养,用免疫荧光细胞化学和RT-PCR法鉴定;构建包含人神经生长因子(NGF)分泌肽-bFGF编码基因的慢病毒载体,并行慢病毒包装,用病毒上清对传代大鼠AECs进行感染并筛选,经免疫荧光细胞化学、RT-PCR及酶联免疫吸附法(ELISA)检测基因转染效果,体外培养观察基因转染后的细胞生长活性;用基因转染细胞的培养上清对PC12细胞进行培养,检测所分泌bFGF多肽的生物学活性. 结果 所培养的大鼠AECs经鉴定能表达上皮特异性标志物CK-19、神经类细胞标志物巢蛋白(nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)以及细胞多能性标志分子SSEA-4、Oct-4、Nanog、Sox2、波形蛋白(vimentin)等;经感染并筛选后扩增培养的大鼠AECs在mRNA水平及多肽水平均能检测到目的 基因bFGF的表达,筛选后的转染细胞生长活性较未转染细胞明显提高,其培养上清能明显促进PC12细胞的生长和分化. 结论 用慢病毒作为载体能成功将bFGF基因转染入大鼠AECs中,所建立的基因修饰AECs能表达并分泌bFGF多肽,具有较强的生长活性及神经营养活性.
目的 探討以慢病毒作為載體,將帶有分泌肽的人堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)基因片段轉入大鼠羊膜上皮細胞(AECs)中,構建能穩定錶達併分泌bFGF多肽的細胞載體. 方法 取妊娠晚期SD大鼠的羊膜組織進行AECs原代培養,用免疫熒光細胞化學和RT-PCR法鑒定;構建包含人神經生長因子(NGF)分泌肽-bFGF編碼基因的慢病毒載體,併行慢病毒包裝,用病毒上清對傳代大鼠AECs進行感染併篩選,經免疫熒光細胞化學、RT-PCR及酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測基因轉染效果,體外培養觀察基因轉染後的細胞生長活性;用基因轉染細胞的培養上清對PC12細胞進行培養,檢測所分泌bFGF多肽的生物學活性. 結果 所培養的大鼠AECs經鑒定能錶達上皮特異性標誌物CK-19、神經類細胞標誌物巢蛋白(nestin)、膠質纖維痠性蛋白(GFAP)以及細胞多能性標誌分子SSEA-4、Oct-4、Nanog、Sox2、波形蛋白(vimentin)等;經感染併篩選後擴增培養的大鼠AECs在mRNA水平及多肽水平均能檢測到目的 基因bFGF的錶達,篩選後的轉染細胞生長活性較未轉染細胞明顯提高,其培養上清能明顯促進PC12細胞的生長和分化. 結論 用慢病毒作為載體能成功將bFGF基因轉染入大鼠AECs中,所建立的基因脩飾AECs能錶達併分泌bFGF多肽,具有較彊的生長活性及神經營養活性.
목적 탐토이만병독작위재체,장대유분비태적인감성성섬유세포생장인자(bFGF)기인편단전입대서양막상피세포(AECs)중,구건능은정표체병분비bFGF다태적세포재체. 방법 취임신만기SD대서적양막조직진행AECs원대배양,용면역형광세포화학화RT-PCR법감정;구건포함인신경생장인자(NGF)분비태-bFGF편마기인적만병독재체,병행만병독포장,용병독상청대전대대서AECs진행감염병사선,경면역형광세포화학、RT-PCR급매련면역흡부법(ELISA)검측기인전염효과,체외배양관찰기인전염후적세포생장활성;용기인전염세포적배양상청대PC12세포진행배양,검측소분비bFGF다태적생물학활성. 결과 소배양적대서AECs경감정능표체상피특이성표지물CK-19、신경류세포표지물소단백(nestin)、효질섬유산성단백(GFAP)이급세포다능성표지분자SSEA-4、Oct-4、Nanog、Sox2、파형단백(vimentin)등;경감염병사선후확증배양적대서AECs재mRNA수평급다태수평균능검측도목적 기인bFGF적표체,사선후적전염세포생장활성교미전염세포명현제고,기배양상청능명현촉진PC12세포적생장화분화. 결론 용만병독작위재체능성공장bFGF기인전염입대서AECs중,소건립적기인수식AECs능표체병분비bFGF다태,구유교강적생장활성급신경영양활성.
