中国兽药杂志
中國獸藥雜誌
중국수약잡지
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY DRUG
2010年
9期
7-9,37
,共4页
李泽鸿%刘文涛%李昌昊%张国利
李澤鴻%劉文濤%李昌昊%張國利
리택홍%류문도%리창호%장국리
DAB389-αMSH%重组毒素%构建%表达
DAB389-αMSH%重組毒素%構建%錶達
DAB389-αMSH%중조독소%구건%표체
利用含有白喉毒素N端序列的基因作上游引物、含有αMSH全序列作下游引物,以pET28a/DAB389-EGF为模板,PCR扩增DAB389-αMSH基因片段,用限制性内切酶EcoR I和Nco I酶切,并插入原核表达载体pET28a的相应位点,构建了重组表达载体pET28a/DAB389-αMSH,在大肠杆菌中表达重组融合蛋白DAB389-αMSH,转化菌经1 mmol/L IPTG、30℃诱导5 h,用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达的重组毒素.结果表明扩增的片段与理论值一致,重组质粒的DNA序列分析正确;SDS-PAGE表明重组毒素相对分子量为43.76 KD,且表达量达菌体总蛋白量的31.6%.Western blot分析显示,重组毒素能特异性地与抗白喉抗体结合,表明已成功构建表达了重组DAB389-αMSH的工程菌株,并获得表达蛋白.
利用含有白喉毒素N耑序列的基因作上遊引物、含有αMSH全序列作下遊引物,以pET28a/DAB389-EGF為模闆,PCR擴增DAB389-αMSH基因片段,用限製性內切酶EcoR I和Nco I酶切,併插入原覈錶達載體pET28a的相應位點,構建瞭重組錶達載體pET28a/DAB389-αMSH,在大腸桿菌中錶達重組融閤蛋白DAB389-αMSH,轉化菌經1 mmol/L IPTG、30℃誘導5 h,用SDS-PAGE和Western blot鑒定錶達的重組毒素.結果錶明擴增的片段與理論值一緻,重組質粒的DNA序列分析正確;SDS-PAGE錶明重組毒素相對分子量為43.76 KD,且錶達量達菌體總蛋白量的31.6%.Western blot分析顯示,重組毒素能特異性地與抗白喉抗體結閤,錶明已成功構建錶達瞭重組DAB389-αMSH的工程菌株,併穫得錶達蛋白.
이용함유백후독소N단서렬적기인작상유인물、함유αMSH전서렬작하유인물,이pET28a/DAB389-EGF위모판,PCR확증DAB389-αMSH기인편단,용한제성내절매EcoR I화Nco I매절,병삽입원핵표체재체pET28a적상응위점,구건료중조표체재체pET28a/DAB389-αMSH,재대장간균중표체중조융합단백DAB389-αMSH,전화균경1 mmol/L IPTG、30℃유도5 h,용SDS-PAGE화Western blot감정표체적중조독소.결과표명확증적편단여이론치일치,중조질립적DNA서렬분석정학;SDS-PAGE표명중조독소상대분자량위43.76 KD,차표체량체균체총단백량적31.6%.Western blot분석현시,중조독소능특이성지여항백후항체결합,표명이성공구건표체료중조DAB389-αMSH적공정균주,병획득표체단백.
