西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2011年
4期
848-855
,共8页
沈玉英%高志红%王飞%佟兆国%张计育%房伟民%章镇
瀋玉英%高誌紅%王飛%佟兆國%張計育%房偉民%章鎮
침옥영%고지홍%왕비%동조국%장계육%방위민%장진
梅%REMAP%技术体系%选择性碱基%PAGE浓度%应用
梅%REMAP%技術體繫%選擇性堿基%PAGE濃度%應用
매%REMAP%기술체계%선택성감기%PAGE농도%응용
通过分析构成梅REMAP分子标记技术体系的主要成分适宜浓度、SSR引物选择性碱基的添加以及REMAP-PCR扩增产物检测的非变性PAGE最佳浓度,建立了适合梅REMAP分子标记的技术体系,并对24个梅品种的遗传多样性进行了分析.结果表明:(1)适宜梅REMAP-PCR的反应体系为:25.0 μL总体积中,基因组DNA 40.0 ng、2.5 mmol/ L MgCl2 1.5 μL、2.5 mmol/L dNTPs 2.0 μL、10×PCR Buffer(TaKaRa) 2.5 μL、Taq DNA聚合酶1.5 U、10 μmol/L LTR引物1.0 μL、10 μmol/L SSR引物1.0 μL,且SSR引物的3′端加碱基可明显提高REMAP的扩增效果,但碱基数量无明显影响.(2)5.0%非变性PAGE电泳条带数量多,扩增范围广(300～2 000 bp),且各品种扩增产物均可显示,能够清晰地反映品种间的多态性.(3)24个梅品种的遗传多样性分析显示,花梅的绿萼型及朱砂型分别聚在一起,这与形态学分类的结果一致,证明建立的REMAP技术体系的有效性和可行性.
通過分析構成梅REMAP分子標記技術體繫的主要成分適宜濃度、SSR引物選擇性堿基的添加以及REMAP-PCR擴增產物檢測的非變性PAGE最佳濃度,建立瞭適閤梅REMAP分子標記的技術體繫,併對24箇梅品種的遺傳多樣性進行瞭分析.結果錶明:(1)適宜梅REMAP-PCR的反應體繫為:25.0 μL總體積中,基因組DNA 40.0 ng、2.5 mmol/ L MgCl2 1.5 μL、2.5 mmol/L dNTPs 2.0 μL、10×PCR Buffer(TaKaRa) 2.5 μL、Taq DNA聚閤酶1.5 U、10 μmol/L LTR引物1.0 μL、10 μmol/L SSR引物1.0 μL,且SSR引物的3′耑加堿基可明顯提高REMAP的擴增效果,但堿基數量無明顯影響.(2)5.0%非變性PAGE電泳條帶數量多,擴增範圍廣(300～2 000 bp),且各品種擴增產物均可顯示,能夠清晰地反映品種間的多態性.(3)24箇梅品種的遺傳多樣性分析顯示,花梅的綠萼型及硃砂型分彆聚在一起,這與形態學分類的結果一緻,證明建立的REMAP技術體繫的有效性和可行性.
통과분석구성매REMAP분자표기기술체계적주요성분괄의농도、SSR인물선택성감기적첨가이급REMAP-PCR확증산물검측적비변성PAGE최가농도,건립료괄합매REMAP분자표기적기술체계,병대24개매품충적유전다양성진행료분석.결과표명:(1)괄의매REMAP-PCR적반응체계위:25.0 μL총체적중,기인조DNA 40.0 ng、2.5 mmol/ L MgCl2 1.5 μL、2.5 mmol/L dNTPs 2.0 μL、10×PCR Buffer(TaKaRa) 2.5 μL、Taq DNA취합매1.5 U、10 μmol/L LTR인물1.0 μL、10 μmol/L SSR인물1.0 μL,차SSR인물적3′단가감기가명현제고REMAP적확증효과,단감기수량무명현영향.(2)5.0%비변성PAGE전영조대수량다,확증범위엄(300～2 000 bp),차각품충확증산물균가현시,능구청석지반영품충간적다태성.(3)24개매품충적유전다양성분석현시,화매적록악형급주사형분별취재일기,저여형태학분류적결과일치,증명건립적REMAP기술체계적유효성화가행성.
