生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2003年
5期
761-766
,共6页
孙兴会%谭理%李平%张宇清%王霞%侯敏%宋后燕%朱运松
孫興會%譚理%李平%張宇清%王霞%侯敏%宋後燕%硃運鬆
손흥회%담리%리평%장우청%왕하%후민%송후연%주운송
尿激酶受体%反义核酸%侵袭%肿瘤细胞%腺病毒
尿激酶受體%反義覈痠%侵襲%腫瘤細胞%腺病毒
뇨격매수체%반의핵산%침습%종류세포%선병독
为了观察尿激酶受体(uPAR)反义核酸对肿瘤细胞体外侵袭的抑制作用,用PCR方法扩增uPAR cDNA 5′端-46 bp～+454 bp一段长500 bp的序列,利用DNA重组技术将其克隆到病毒载体pAdeno-X中, 构建出重组腺病毒载体pAdeno-X-uPAR(-)和pAdeno-X-uPAR(+).线性化后的重组腺病毒载体转染HEK293细胞7天后,可以获得滴度分别为1.5×108 pfu/ml和0.5×108 pfu/ml的uPAR反义和正义核酸表达重组腺病毒,分别命名为Ad-uPAR(-)和Ad-uPAR(+).以不同的病毒感染指数(MOI)感染人肺巨细胞癌高转移株95D肿瘤细胞,3天后用RNA印迹法可以检测肿瘤细胞uPAR正义和反义核酸表达水平,随着MOI的升高,Ad-uPAR(-)感染的肿瘤细胞uPAR蛋白水平逐渐下降,肿瘤细胞的体外侵袭能力也明显下降,而感染Ad-uPAR(+)的肿瘤细胞无明显变化.结果表明,重组腺病毒可以表达uPAR正义和反义核酸,uPAR反义核酸可以明显抑制人肺巨细胞癌高转移株95D肿瘤细胞在体外的侵袭能力.
為瞭觀察尿激酶受體(uPAR)反義覈痠對腫瘤細胞體外侵襲的抑製作用,用PCR方法擴增uPAR cDNA 5′耑-46 bp～+454 bp一段長500 bp的序列,利用DNA重組技術將其剋隆到病毒載體pAdeno-X中, 構建齣重組腺病毒載體pAdeno-X-uPAR(-)和pAdeno-X-uPAR(+).線性化後的重組腺病毒載體轉染HEK293細胞7天後,可以穫得滴度分彆為1.5×108 pfu/ml和0.5×108 pfu/ml的uPAR反義和正義覈痠錶達重組腺病毒,分彆命名為Ad-uPAR(-)和Ad-uPAR(+).以不同的病毒感染指數(MOI)感染人肺巨細胞癌高轉移株95D腫瘤細胞,3天後用RNA印跡法可以檢測腫瘤細胞uPAR正義和反義覈痠錶達水平,隨著MOI的升高,Ad-uPAR(-)感染的腫瘤細胞uPAR蛋白水平逐漸下降,腫瘤細胞的體外侵襲能力也明顯下降,而感染Ad-uPAR(+)的腫瘤細胞無明顯變化.結果錶明,重組腺病毒可以錶達uPAR正義和反義覈痠,uPAR反義覈痠可以明顯抑製人肺巨細胞癌高轉移株95D腫瘤細胞在體外的侵襲能力.
위료관찰뇨격매수체(uPAR)반의핵산대종류세포체외침습적억제작용,용PCR방법확증uPAR cDNA 5′단-46 bp～+454 bp일단장500 bp적서렬,이용DNA중조기술장기극륭도병독재체pAdeno-X중, 구건출중조선병독재체pAdeno-X-uPAR(-)화pAdeno-X-uPAR(+).선성화후적중조선병독재체전염HEK293세포7천후,가이획득적도분별위1.5×108 pfu/ml화0.5×108 pfu/ml적uPAR반의화정의핵산표체중조선병독,분별명명위Ad-uPAR(-)화Ad-uPAR(+).이불동적병독감염지수(MOI)감염인폐거세포암고전이주95D종류세포,3천후용RNA인적법가이검측종류세포uPAR정의화반의핵산표체수평,수착MOI적승고,Ad-uPAR(-)감염적종류세포uPAR단백수평축점하강,종류세포적체외침습능력야명현하강,이감염Ad-uPAR(+)적종류세포무명현변화.결과표명,중조선병독가이표체uPAR정의화반의핵산,uPAR반의핵산가이명현억제인폐거세포암고전이주95D종류세포재체외적침습능력.
