CAJ | 학술논문

目的应用基因表达谱芯片研究强化铁营养对铁缺乏耳聋Wistar大鼠耳蜗膜性结构基因表达的影响.方法体重28～45 g、健康、无耳疾、ABR反应阈值正常的幼龄Wistar大鼠66只,随机分成正常对照组12只,标准饲料喂养12周;缺铁大鼠组54只,以缺铁饲料喂养法建立缺铁模型,饲养8周后,复制出至少有一耳ABR阈值改变≥15 dB的大鼠共21只,再将该21只大鼠随机分成缺铁耳聋组11只,补铁治疗组10只,缺铁耳聋组继续喂以缺铁饲料4周,补铁治疗组喂以强化铁饲料4周.将包含了4096条的大鼠靶基因用点样仪点在特制玻片上制备成表达谱芯片,分别取缺铁耳聋组(与正常对照组比较)、强化铁治疗组(与缺铁耳聋组比较)的耳蜗膜性组织mRNA,通过逆转录方法,将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两种组织的cDNA上,制成cDNA探针,并与表达谱芯片进行杂交及扫描.筛选出部分差异表达基因,另用RT-PCR验证.结果缺铁耳聋组与正常对照组比较:前者筛选出差异表达基因896条,其中上调基因447条,下调基因449条.肌动蛋白基因及其相关调节蛋白基因的表达发生了改变,其中肌动蛋白基因Arpclb、Actcl、Actb、Actal都表现为下调,肌动蛋白的抑制蛋白基因ProfilinⅡ上调.细胞骨架蛋白Tubulin、Myosin和热休克蛋白(heat shock protein,HSP)下调.强化铁治疗组与缺铁耳聋组比较:前者筛选出差异表达基因355条,其中上调基因128条,下调基因227条.细胞骨架蛋白Tubulin、Myosin和热休克蛋白(HSP)上调,肌动蛋白基因表达没有发生明显改变.从中选取5条差异表达基因:BC072490(Ctsb)、CF111145(Actb)、NM013146(Cald1)、AB011679(Tubb5)、BC063175(ctsl),用RT-PCR验证,RT-PCR结果与基因芯片结果基本一致.结论铁缺乏通过影响耳蜗膜性结构中多种基因的表达,包括肌动蛋白基因及其相关调节蛋白基因的表达,从而导致感音神经性聋.强化铁营养可能通过调节机体的整体代谢而有助于改善听力,但对肌动蛋白基因表达没有明显影响. 目的應用基因錶達譜芯片研究彊化鐵營養對鐵缺乏耳聾Wistar大鼠耳蝸膜性結構基因錶達的影響.方法體重28～45 g、健康、無耳疾、ABR反應閾值正常的幼齡Wistar大鼠66隻,隨機分成正常對照組12隻,標準飼料餵養12週;缺鐵大鼠組54隻,以缺鐵飼料餵養法建立缺鐵模型,飼養8週後,複製齣至少有一耳ABR閾值改變≥15 dB的大鼠共21隻,再將該21隻大鼠隨機分成缺鐵耳聾組11隻,補鐵治療組10隻,缺鐵耳聾組繼續餵以缺鐵飼料4週,補鐵治療組餵以彊化鐵飼料4週.將包含瞭4096條的大鼠靶基因用點樣儀點在特製玻片上製備成錶達譜芯片,分彆取缺鐵耳聾組(與正常對照組比較)、彊化鐵治療組(與缺鐵耳聾組比較)的耳蝸膜性組織mRNA,通過逆轉錄方法,將Cy3和Cy5兩種熒光分彆標記到兩種組織的cDNA上,製成cDNA探針,併與錶達譜芯片進行雜交及掃描.篩選齣部分差異錶達基因,另用RT-PCR驗證.結果缺鐵耳聾組與正常對照組比較:前者篩選齣差異錶達基因896條,其中上調基因447條,下調基因449條.肌動蛋白基因及其相關調節蛋白基因的錶達髮生瞭改變,其中肌動蛋白基因Arpclb、Actcl、Actb、Actal都錶現為下調,肌動蛋白的抑製蛋白基因ProfilinⅡ上調.細胞骨架蛋白Tubulin、Myosin和熱休剋蛋白(heat shock protein,HSP)下調.彊化鐵治療組與缺鐵耳聾組比較:前者篩選齣差異錶達基因355條,其中上調基因128條,下調基因227條.細胞骨架蛋白Tubulin、Myosin和熱休剋蛋白(HSP)上調,肌動蛋白基因錶達沒有髮生明顯改變.從中選取5條差異錶達基因:BC072490(Ctsb)、CF111145(Actb)、NM013146(Cald1)、AB011679(Tubb5)、BC063175(ctsl),用RT-PCR驗證,RT-PCR結果與基因芯片結果基本一緻.結論鐵缺乏通過影響耳蝸膜性結構中多種基因的錶達,包括肌動蛋白基因及其相關調節蛋白基因的錶達,從而導緻感音神經性聾.彊化鐵營養可能通過調節機體的整體代謝而有助于改善聽力,但對肌動蛋白基因錶達沒有明顯影響.
목적 응용기인표체보심편연구강화철영양대철결핍이롱Wistar대서이와막성결구기인표체적영향.방법체중28～45 g、건강、무이질、ABR반응역치정상적유령Wistar대서66지,수궤분성정상대조조12지,표준사료위양12주;결철대서조54지,이결철사료위양법건립결철모형,사양8주후,복제출지소유일이ABR역치개변≥15 dB적대서공21지,재장해21지대서수궤분성결철이롱조11지,보철치료조10지,결철이롱조계속위이결철사료4주,보철치료조위이강화철사료4주.장포함료4096조적대서파기인용점양의점재특제파편상제비성표체보심편,분별취결철이롱조(여정상대조조비교)、강화철치료조(여결철이롱조비교)적이와막성조직mRNA,통과역전록방법,장Cy3화Cy5량충형광분별표기도량충조직적cDNA상,제성cDNA탐침,병여표체보심편진행잡교급소묘.사선출부분차이표체기인,령용RT-PCR험증.결과결철이롱조여정상대조조비교:전자사선출차이표체기인896조,기중상조기인447조,하조기인449조.기동단백기인급기상관조절단백기인적표체발생료개변,기중기동단백기인Arpclb、Actcl、Actb、Actal도표현위하조,기동단백적억제단백기인ProfilinⅡ상조.세포골가단백Tubulin、Myosin화열휴극단백(heat shock protein,HSP)하조.강화철치료조여결철이롱조비교:전자사선출차이표체기인355조,기중상조기인128조,하조기인227조.세포골가단백Tubulin、Myosin화열휴극단백(HSP)상조,기동단백기인표체몰유발생명현개변.종중선취5조차이표체기인:BC072490(Ctsb)、CF111145(Actb)、NM013146(Cald1)、AB011679(Tubb5)、BC063175(ctsl),용RT-PCR험증,RT-PCR결과여기인심편결과기본일치.결론철결핍통과영향이와막성결구중다충기인적표체,포괄기동단백기인급기상관조절단백기인적표체,종이도치감음신경성롱.강화철영양가능통과조절궤체적정체대사이유조우개선은력,단대기동단백기인표체몰유명현영향.