中国生物防治
中國生物防治
중국생물방치
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICAL CONTROL
2010年
3期
327-334
,共8页
刘连盟%张亚波%李安娜%李多川
劉連盟%張亞波%李安娜%李多川
류련맹%장아파%리안나%리다천
菌寄生真菌%纤细齿梗孢%丝氨酸蛋白酶%cDNA克隆%毕赤酵母%表达
菌寄生真菌%纖細齒梗孢%絲氨痠蛋白酶%cDNA剋隆%畢赤酵母%錶達
균기생진균%섬세치경포%사안산단백매%cDNA극륭%필적효모%표체
纤细齿梗孢Olpitrichum tenellum 是一种寄生在轮枝镰孢菌Fusarium verticillioides上的活体营养菌寄生真菌.丝氨酸蛋白酶在菌寄生过程可能起到重要作用.根据丝状真菌丝氨酸蛋白酶的同源保守序列设计简并引物,通过RT-PCR及RACE的方法,克隆得到1845bp的全长cDNA片段.其可读框为1554bp(GenBank登录号为EU368754),编码517个氨基酸的蛋白质.比对分析发现该蛋白是一种分泌型的丝氨酸蛋白酶,属于丝氨酸蛋白酶S8家族的枯草杆菌蛋白酶subtilisin,具有典型的信号肽-前肽-成熟肽的结构.将该基因可读框除去信号肽插入酵母表达载体pPIC9K,转化毕赤酵母Pichia pastoris GS115,在甲醇诱导下成功分泌出具有生物活性的重组蛋白酶,诱导120h后酶活性可达153U/ml.重组蛋白酶经DEAE-Sepharose层析进行纯化,SDS-PAGE分析其分子量为39kD.其反应的最适温度为60℃,最适pH为8.
纖細齒梗孢Olpitrichum tenellum 是一種寄生在輪枝鐮孢菌Fusarium verticillioides上的活體營養菌寄生真菌.絲氨痠蛋白酶在菌寄生過程可能起到重要作用.根據絲狀真菌絲氨痠蛋白酶的同源保守序列設計簡併引物,通過RT-PCR及RACE的方法,剋隆得到1845bp的全長cDNA片段.其可讀框為1554bp(GenBank登錄號為EU368754),編碼517箇氨基痠的蛋白質.比對分析髮現該蛋白是一種分泌型的絲氨痠蛋白酶,屬于絲氨痠蛋白酶S8傢族的枯草桿菌蛋白酶subtilisin,具有典型的信號肽-前肽-成熟肽的結構.將該基因可讀框除去信號肽插入酵母錶達載體pPIC9K,轉化畢赤酵母Pichia pastoris GS115,在甲醇誘導下成功分泌齣具有生物活性的重組蛋白酶,誘導120h後酶活性可達153U/ml.重組蛋白酶經DEAE-Sepharose層析進行純化,SDS-PAGE分析其分子量為39kD.其反應的最適溫度為60℃,最適pH為8.
섬세치경포Olpitrichum tenellum 시일충기생재륜지렴포균Fusarium verticillioides상적활체영양균기생진균.사안산단백매재균기생과정가능기도중요작용.근거사상진균사안산단백매적동원보수서렬설계간병인물,통과RT-PCR급RACE적방법,극륭득도1845bp적전장cDNA편단.기가독광위1554bp(GenBank등록호위EU368754),편마517개안기산적단백질.비대분석발현해단백시일충분비형적사안산단백매,속우사안산단백매S8가족적고초간균단백매subtilisin,구유전형적신호태-전태-성숙태적결구.장해기인가독광제거신호태삽입효모표체재체pPIC9K,전화필적효모Pichia pastoris GS115,재갑순유도하성공분비출구유생물활성적중조단백매,유도120h후매활성가체153U/ml.중조단백매경DEAE-Sepharose층석진행순화,SDS-PAGE분석기분자량위39kD.기반응적최괄온도위60℃,최괄pH위8.
