中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2010年
5期
1256-1259
,共4页
和艳敏%陶苏丹%应燕玲%朱发明%吕杭军%严力行
和豔敏%陶囌丹%應燕玲%硃髮明%呂杭軍%嚴力行
화염민%도소단%응연령%주발명%려항군%엄역행
MICA基因%基因克隆%原核表达
MICA基因%基因剋隆%原覈錶達
MICA기인%기인극륭%원핵표체
本研究构建mica基因原核表达系统并纯化MICA蛋白.利用外周血标本提取RNA,经RT-PCR获取mica基因cDNA.将mica cDNA经TOPO克隆连接构建克隆载体,然后将克隆重组载体和原核表达栽体pET-28a经双酶切后进行连接构建重组表达载体,进而转染宿主菌E. coli BL21 DE3进行表达.利用亲和层析的Ni-NTA Spin纯化重组的MICA蛋白.结果表明:带有重组质粒pET-28a-mica的宿主菌经IPTG诱导表达后,以可溶性形式大量表达重组的MICA蛋白,经Ni-NTA Spin纯化后得到重组的MICA蛋白.结论:本研究构建了mica基因原核表达系统并纯化了MICA蛋白,为探讨MICA与移植免疫的关系奠定了基础.
本研究構建mica基因原覈錶達繫統併純化MICA蛋白.利用外週血標本提取RNA,經RT-PCR穫取mica基因cDNA.將mica cDNA經TOPO剋隆連接構建剋隆載體,然後將剋隆重組載體和原覈錶達栽體pET-28a經雙酶切後進行連接構建重組錶達載體,進而轉染宿主菌E. coli BL21 DE3進行錶達.利用親和層析的Ni-NTA Spin純化重組的MICA蛋白.結果錶明:帶有重組質粒pET-28a-mica的宿主菌經IPTG誘導錶達後,以可溶性形式大量錶達重組的MICA蛋白,經Ni-NTA Spin純化後得到重組的MICA蛋白.結論:本研究構建瞭mica基因原覈錶達繫統併純化瞭MICA蛋白,為探討MICA與移植免疫的關繫奠定瞭基礎.
본연구구건mica기인원핵표체계통병순화MICA단백.이용외주혈표본제취RNA,경RT-PCR획취mica기인cDNA.장mica cDNA경TOPO극륭련접구건극륭재체,연후장극륭중조재체화원핵표체재체pET-28a경쌍매절후진행련접구건중조표체재체,진이전염숙주균E. coli BL21 DE3진행표체.이용친화층석적Ni-NTA Spin순화중조적MICA단백.결과표명:대유중조질립pET-28a-mica적숙주균경IPTG유도표체후,이가용성형식대량표체중조적MICA단백,경Ni-NTA Spin순화후득도중조적MICA단백.결론:본연구구건료mica기인원핵표체계통병순화료MICA단백,위탐토MICA여이식면역적관계전정료기출.
