重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2011年
2期
181-184
,共4页
乙肝病毒%抗原基因%真核表达载体%瞬时转染
乙肝病毒%抗原基因%真覈錶達載體%瞬時轉染
을간병독%항원기인%진핵표체재체%순시전염
目的:构建乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)相关抗原基因真核表达载体,检测各抗原基因在体外真核细胞中的表达情况.方法:以含有1.3倍的HBV全基因组序列的质粒PcDNA3.1-HBV为模板,PCR扩增HBV的各抗原基因片段,通过连接至中间克隆载体Peasy-T1-Simple,酶切及测序鉴定正确后,再将目的片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建包含HBV抗原基因的重组表达质粒pcDNA3.1(+)-HBs,pcDNA3.1(+)-HBe,pcDNA3.1(+)-HBc.阳性克隆用限制性内切酶酶切鉴定正确后用脂质体2000分别瞬时转染HepG2细胞,同时转染LO2细胞作为对照,Western blot和免疫荧光技术分别检测各抗原基因产物在细胞内的表达.结果:成功扩增出HBV各抗原基因片段,通过酶切测序鉴定证明成功构建了包含HBV抗原基因的重组表达质粒pcDNA3.1(+)-HBs,pcDNA3.1(+)-HBe,pcDNA3.1(+)-HBc,Western blot和免疫荧光检测到目的蛋白在转染细胞中的正确表达.结论:本实验成功构建包含HBV抗原基因的真核表达载体,并能在体外真核细胞中表达相关抗原蛋白,为进一步研究各抗原的生物学功能奠定了实验基础.
目的:構建乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)相關抗原基因真覈錶達載體,檢測各抗原基因在體外真覈細胞中的錶達情況.方法:以含有1.3倍的HBV全基因組序列的質粒PcDNA3.1-HBV為模闆,PCR擴增HBV的各抗原基因片段,通過連接至中間剋隆載體Peasy-T1-Simple,酶切及測序鑒定正確後,再將目的片段插入真覈錶達載體pcDNA3.1(+)中,構建包含HBV抗原基因的重組錶達質粒pcDNA3.1(+)-HBs,pcDNA3.1(+)-HBe,pcDNA3.1(+)-HBc.暘性剋隆用限製性內切酶酶切鑒定正確後用脂質體2000分彆瞬時轉染HepG2細胞,同時轉染LO2細胞作為對照,Western blot和免疫熒光技術分彆檢測各抗原基因產物在細胞內的錶達.結果:成功擴增齣HBV各抗原基因片段,通過酶切測序鑒定證明成功構建瞭包含HBV抗原基因的重組錶達質粒pcDNA3.1(+)-HBs,pcDNA3.1(+)-HBe,pcDNA3.1(+)-HBc,Western blot和免疫熒光檢測到目的蛋白在轉染細胞中的正確錶達.結論:本實驗成功構建包含HBV抗原基因的真覈錶達載體,併能在體外真覈細胞中錶達相關抗原蛋白,為進一步研究各抗原的生物學功能奠定瞭實驗基礎.
목적:구건을간병독(Hepatitis B virus,HBV)상관항원기인진핵표체재체,검측각항원기인재체외진핵세포중적표체정황.방법:이함유1.3배적HBV전기인조서렬적질립PcDNA3.1-HBV위모판,PCR확증HBV적각항원기인편단,통과련접지중간극륭재체Peasy-T1-Simple,매절급측서감정정학후,재장목적편단삽입진핵표체재체pcDNA3.1(+)중,구건포함HBV항원기인적중조표체질립pcDNA3.1(+)-HBs,pcDNA3.1(+)-HBe,pcDNA3.1(+)-HBc.양성극륭용한제성내절매매절감정정학후용지질체2000분별순시전염HepG2세포,동시전염LO2세포작위대조,Western blot화면역형광기술분별검측각항원기인산물재세포내적표체.결과:성공확증출HBV각항원기인편단,통과매절측서감정증명성공구건료포함HBV항원기인적중조표체질립pcDNA3.1(+)-HBs,pcDNA3.1(+)-HBe,pcDNA3.1(+)-HBc,Western blot화면역형광검측도목적단백재전염세포중적정학표체.결론:본실험성공구건포함HBV항원기인적진핵표체재체,병능재체외진핵세포중표체상관항원단백,위진일보연구각항원적생물학공능전정료실험기출.
