南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2011年
6期
937-942
,共6页
张亮%阎瑾琦%王越%肖毅%高昆%董金凯%王博%于继云
張亮%閻瑾琦%王越%肖毅%高昆%董金凱%王博%于繼雲
장량%염근기%왕월%초의%고곤%동금개%왕박%우계운
SFV%DNA疫苗%融合肿瘤抗原%体内外表达
SFV%DNA疫苗%融閤腫瘤抗原%體內外錶達
SFV%DNA역묘%융합종류항원%체내외표체
目的 构建以塞姆利基森林病毒复制子载体为基础的可复制型抗肿瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB,验证其在人胚肾293T细胞及免疫小鼠肌肉组织内的表达情况.方法 首先用NheI酶切既往构建的pVAX1-2PFcGB重组质粒,补平酶切后的粘末端,然后再用限制性内切酶BssHII继续酶切该线性化质粒,补平粘末端后即获得含有编码Surivin及hCGB-CTP37肿瘤抗原的融合基因片段2PFcGB,接着利用DNA重组技术将该片段克隆人基于塞姆利基森林病毒复制子载体改造的PSCK载体,筛选阳性重组质粒.接着,利用阳离子脂质体介导法将其瞬时转染入人胚肾293T细胞,利用流式细胞术及免疫荧光法检测融合抗原在293T细胞中的表达;利用电脉冲基因导入仪将该重组质粒递送至BALB/C小鼠股四头肌,利用免疫组化法验证肿瘤抗原在小鼠体内的表达.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示酶切片段大小与预期一致,流式细胞术检测该重组质粒瞬时转染的293T细胞,可见大量的阳性荧光细胞,其IRES序列上游融合肿瘤抗原分子阳性表达率为5.70%,下游佐剂分子阳性表达率为19.75%;同时,利用两种肿瘤抗原特异抗体在免疫小鼠股四头肌组织切片上均检测到了相应表达.结论 成功构建了可复制型抗肿瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB,该重组质粒在体内外均能高效表达外源肿瘤抗原及佐剂分子,这些结果为该抗肿瘤DNA疫苗进一步的抑瘤活性及免疫学作用机制的研究奠定了坚实的实验基础.
目的 構建以塞姆利基森林病毒複製子載體為基礎的可複製型抗腫瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB,驗證其在人胚腎293T細胞及免疫小鼠肌肉組織內的錶達情況.方法 首先用NheI酶切既往構建的pVAX1-2PFcGB重組質粒,補平酶切後的粘末耑,然後再用限製性內切酶BssHII繼續酶切該線性化質粒,補平粘末耑後即穫得含有編碼Surivin及hCGB-CTP37腫瘤抗原的融閤基因片段2PFcGB,接著利用DNA重組技術將該片段剋隆人基于塞姆利基森林病毒複製子載體改造的PSCK載體,篩選暘性重組質粒.接著,利用暘離子脂質體介導法將其瞬時轉染入人胚腎293T細胞,利用流式細胞術及免疫熒光法檢測融閤抗原在293T細胞中的錶達;利用電脈遲基因導入儀將該重組質粒遞送至BALB/C小鼠股四頭肌,利用免疫組化法驗證腫瘤抗原在小鼠體內的錶達.結果 瓊脂糖凝膠電泳結果顯示酶切片段大小與預期一緻,流式細胞術檢測該重組質粒瞬時轉染的293T細胞,可見大量的暘性熒光細胞,其IRES序列上遊融閤腫瘤抗原分子暘性錶達率為5.70%,下遊佐劑分子暘性錶達率為19.75%;同時,利用兩種腫瘤抗原特異抗體在免疫小鼠股四頭肌組織切片上均檢測到瞭相應錶達.結論 成功構建瞭可複製型抗腫瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB,該重組質粒在體內外均能高效錶達外源腫瘤抗原及佐劑分子,這些結果為該抗腫瘤DNA疫苗進一步的抑瘤活性及免疫學作用機製的研究奠定瞭堅實的實驗基礎.
목적 구건이새모리기삼림병독복제자재체위기출적가복제형항종류DNA역묘PSCK-2PFcGB,험증기재인배신293T세포급면역소서기육조직내적표체정황.방법 수선용NheI매절기왕구건적pVAX1-2PFcGB중조질립,보평매절후적점말단,연후재용한제성내절매BssHII계속매절해선성화질립,보평점말단후즉획득함유편마Surivin급hCGB-CTP37종류항원적융합기인편단2PFcGB,접착이용DNA중조기술장해편단극륭인기우새모리기삼림병독복제자재체개조적PSCK재체,사선양성중조질립.접착,이용양리자지질체개도법장기순시전염입인배신293T세포,이용류식세포술급면역형광법검측융합항원재293T세포중적표체;이용전맥충기인도입의장해중조질립체송지BALB/C소서고사두기,이용면역조화법험증종류항원재소서체내적표체.결과 경지당응효전영결과현시매절편단대소여예기일치,류식세포술검측해중조질립순시전염적293T세포,가견대량적양성형광세포,기IRES서렬상유융합종류항원분자양성표체솔위5.70%,하유좌제분자양성표체솔위19.75%;동시,이용량충종류항원특이항체재면역소서고사두기조직절편상균검측도료상응표체.결론 성공구건료가복제형항종류DNA역묘PSCK-2PFcGB,해중조질립재체내외균능고효표체외원종류항원급좌제분자,저사결과위해항종류DNA역묘진일보적억류활성급면역학작용궤제적연구전정료견실적실험기출.
