CAJ | 학술논문

将鸡γ-干扰素(chIFN-γ)基因先克隆,接着通过大肠杆菌表达后进行产物纯化与活性检测.通过PCR方法以带有信号肽的重组质粒PMD-18T-preIFN-γ为模板,扩增无信号肤chIFN-γ基因片段,克隆至原核表达载体pProEXTM HTa,构建重组表达质粒pProEXTM HTa-chIFN-γ,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,然后利用Novagen蛋白纯化试剂盒进行天然纯化可溶性蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blot鉴定,同时利用CEF-NDV系统测定抗病毒活性.结果表明,459bp的chIFN-γ成熟蛋白编码基因被成功克隆,同时chIFN-γ蛋白在大肠杆菌中也获得了成功表达,分子质量约为20 ku,能与抗His的单克隆抗体发生特异性反应.表达蛋白一部分形成包涵体,另一部分以可溶形式存在,可溶性蛋白经镍柱在天然条件下的纯化得率约为1.9 mg· mL-1.生物学活性试验表明,1∶54稀释纯化的重组chIFN-γ( rchIFN-γ)孵育CEF细胞后能抵抗100TCID50的NDV(新城疫Ⅳ系弱毒苗)攻击.研究纯化获得的rchIFN-γ具有较好的抗病毒活性,为研制新型抗病毒干扰素制剂奠定基础.
장계γ-간우소(chIFN-γ)기인선극륭,접착통과대장간균표체후진행산물순화여활성검측.통과PCR방법이대유신호태적중조질립PMD-18T-preIFN-γ위모판,확증무신호부chIFN-γ기인편단,극륭지원핵표체재체pProEXTM HTa,구건중조표체질립pProEXTM HTa-chIFN-γ,재대장간균BL21(DE3)중경IPTG유도표체,연후이용Novagen단백순화시제합진행천연순화가용성단백,병진행SDS-PAGE、Western blot감정,동시이용CEF-NDV계통측정항병독활성.결과표명,459bp적chIFN-γ성숙단백편마기인피성공극륭,동시chIFN-γ단백재대장간균중야획득료성공표체,분자질량약위20 ku,능여항His적단극륭항체발생특이성반응.표체단백일부분형성포함체,령일부분이가용형식존재,가용성단백경얼주재천연조건하적순화득솔약위1.9 mg· mL-1.생물학활성시험표명,1∶54희석순화적중조chIFN-γ( rchIFN-γ)부육CEF세포후능저항100TCID50적NDV(신성역Ⅳ계약독묘)공격.연구순화획득적rchIFN-γ구유교호적항병독활성,위연제신형항병독간우소제제전정기출.