中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2012年
1期
159-163
,共5页
吴顺泉%林君%黄胜林%战榕
吳順泉%林君%黃勝林%戰榕
오순천%림군%황성림%전용
慢病毒%荧光素酶报告载体%microRNA%靶基因%3’非翻译区
慢病毒%熒光素酶報告載體%microRNA%靶基因%3’非翻譯區
만병독%형광소매보고재체%microRNA%파기인%3’비번역구
本研究旨在建立miRNA靶基因高通量筛选系统,筛选出能调控p21NAs,以便试验验证及探索这些miRNA的生物学功能及意义.利用分子克隆技术构建并鉴定2个慢病毒表达载体-pWPXL-Luc及pWPXL -Luc -P21-3 'UTR,分别与包装载体psPAX-2及PDM2G共转染HEK 293T细胞；包装病毒颗粒,感染HEK 293细胞,获得稳定单表达荧光素酶及共表达荧光素酶与P21-3'UTR的细胞株,前者在后续实验中作为对照；采用荧光素酶检测试剂检测pWPXL-Luc病毒感染后的293细胞的荧光素酶活性.结果表明:包装出高滴度的病毒颗粒,成功建立稳定株,且在一定范围内稳定株细胞的荧光素酶活性与细胞数目成正比.结论:成功建立了miRNA靶基因高通量筛选系统；利用本筛选系统,成功筛选出靶向细胞周期调控基因P21( CIP1/WAF1)的miRNA.
本研究旨在建立miRNA靶基因高通量篩選繫統,篩選齣能調控p21NAs,以便試驗驗證及探索這些miRNA的生物學功能及意義.利用分子剋隆技術構建併鑒定2箇慢病毒錶達載體-pWPXL-Luc及pWPXL -Luc -P21-3 'UTR,分彆與包裝載體psPAX-2及PDM2G共轉染HEK 293T細胞；包裝病毒顆粒,感染HEK 293細胞,穫得穩定單錶達熒光素酶及共錶達熒光素酶與P21-3'UTR的細胞株,前者在後續實驗中作為對照；採用熒光素酶檢測試劑檢測pWPXL-Luc病毒感染後的293細胞的熒光素酶活性.結果錶明:包裝齣高滴度的病毒顆粒,成功建立穩定株,且在一定範圍內穩定株細胞的熒光素酶活性與細胞數目成正比.結論:成功建立瞭miRNA靶基因高通量篩選繫統；利用本篩選繫統,成功篩選齣靶嚮細胞週期調控基因P21( CIP1/WAF1)的miRNA.
본연구지재건립miRNA파기인고통량사선계통,사선출능조공p21NAs,이편시험험증급탐색저사miRNA적생물학공능급의의.이용분자극륭기술구건병감정2개만병독표체재체-pWPXL-Luc급pWPXL -Luc -P21-3 'UTR,분별여포장재체psPAX-2급PDM2G공전염HEK 293T세포；포장병독과립,감염HEK 293세포,획득은정단표체형광소매급공표체형광소매여P21-3'UTR적세포주,전자재후속실험중작위대조；채용형광소매검측시제검측pWPXL-Luc병독감염후적293세포적형광소매활성.결과표명:포장출고적도적병독과립,성공건립은정주,차재일정범위내은정주세포적형광소매활성여세포수목성정비.결론:성공건립료miRNA파기인고통량사선계통；이용본사선계통,성공사선출파향세포주기조공기인P21( CIP1/WAF1)적miRNA.
