人AWP1-RFP融合基因重组腺病毒的快速构建及其鉴定
인AWP1-RFP융합기인중조선병독적쾌속구건급기감정
Rapid construction of AWP1-RFP fused gene recombinant adenovirus vector and its identification
  • 万方数据
    中华神经医学杂志 중화신경의학잡지
    CHINESE JOURNAL OF NEUROMEDICINE
    2005年 5期 434-438 ,共5页

    曹永宽%莫永炎%田伏洲%邓鹏%秦清和%邢飞跃%李红乐%姜勇

    조영관%막영염%전복주%산붕%진청화%형비약%리홍악%강용

    AWP1%红色荧光蛋白%重组腺病毒%绿色荧光蛋白 AWP1%紅色熒光蛋白%重組腺病毒%綠色熒光蛋白
    AWP1%홍색형광단백%중조선병독%록색형광단백
    目的构建人的AWP1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因的重组腺病毒载体,为研究AWP1的生物功能提供工具. 方法将克隆的AWP1 cDNA插入高效表达RFP的载体pDsRed1N1的多克隆位点,与RFP序列形成AWP1-RFP融合基因,将该融合基因亚克隆到穿梭载体pAdTrack-CMV和pAdShuttle-CMV中;经酶切鉴定正确后Pme Ⅰ线形化,与骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183以同源重组;用lipofectAMINE将Pac Ⅰ线形化的同源重组腺病毒载体转染293细胞以包装腺病毒;通过同源重组病毒载体和病毒颗粒基因组的DNA测序及PCR扩增和在293细胞中的表达鉴定重组腺病毒.结果同源重组载体和病毒颗粒的DNA测序和PCR分析显示AWP1cDNA序列正确,感染293细胞获得了AWP1-RFP融合蛋白的高效表达.结论成功构建和包装了人AWP1-RFP融合基因重组腺病毒.
    목적구건인적AWP1여홍색형광단백(RFP)융합기인적중조선병독재체,위연구AWP1적생물공능제공공구. 방법장극륭적AWP1 cDNA삽입고효표체RFP적재체pDsRed1N1적다극륭위점,여RFP서렬형성AWP1-RFP융합기인,장해융합기인아극륭도천사재체pAdTrack-CMV화pAdShuttle-CMV중;경매절감정정학후Pme Ⅰ선형화,여골가질립pAdEasy-1공전염대장간균BJ5183이동원중조;용lipofectAMINE장Pac Ⅰ선형화적동원중조선병독재체전염293세포이포장선병독;통과동원중조병독재체화병독과립기인조적DNA측서급PCR확증화재293세포중적표체감정중조선병독.결과동원중조재체화병독과립적DNA측서화PCR분석현시AWP1cDNA서렬정학,감염293세포획득료AWP1-RFP융합단백적고효표체.결론성공구건화포장료인AWP1-RFP융합기인중조선병독.
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