中国兽医杂志
中國獸醫雜誌
중국수의잡지
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY MEDICINE
2005年
11期
3-5
,共3页
杜建%王志亮%宋厚辉%金宁一%张念祖
杜建%王誌亮%宋厚輝%金寧一%張唸祖
두건%왕지량%송후휘%금저일%장념조
马动脉炎病毒%结构蛋白基因%克隆%汉逊酵母菌
馬動脈炎病毒%結構蛋白基因%剋隆%漢遜酵母菌
마동맥염병독%결구단백기인%극륭%한손효모균
目的:构建马动脉炎病毒读码框ORF5、ORF6、ORF7主要结构蛋白基因全长片段的克隆载体及汉逊酵母穿梭载体,并获得重组工程菌,为下一步酵母表达重组目的蛋白奠定基础.方法:应用RT-PCR方法从病毒核酸中扩增ORF5、ORF6和ORF7读码框的全长基因,产物回收后分别与PUC18和PMD18-T载体连接并转化DH5α E.coli,经氨苄筛选及测序,建立克隆载体PUC18-GL、PUC18-M和PMD18T-ORF7;以构建的克隆载体为模板,用重新设计的引物构建了汉逊酵母分泌性穿梭载体,然后电转化至汉逊酵母基因组中.结果:所有重组质粒经 PCR和酶切鉴定均出现目的片段,测序结果证实正确,目的基因ORF5、ORF6与酵母重组成功.结论:构建了含有目的基因ORF5、ORF6的重组酵母工程菌,为实现分泌表达目的蛋白 ,进而研制病毒亚单位疫苗及诊断试剂提供了物质基础.
目的:構建馬動脈炎病毒讀碼框ORF5、ORF6、ORF7主要結構蛋白基因全長片段的剋隆載體及漢遜酵母穿梭載體,併穫得重組工程菌,為下一步酵母錶達重組目的蛋白奠定基礎.方法:應用RT-PCR方法從病毒覈痠中擴增ORF5、ORF6和ORF7讀碼框的全長基因,產物迴收後分彆與PUC18和PMD18-T載體連接併轉化DH5α E.coli,經氨芐篩選及測序,建立剋隆載體PUC18-GL、PUC18-M和PMD18T-ORF7;以構建的剋隆載體為模闆,用重新設計的引物構建瞭漢遜酵母分泌性穿梭載體,然後電轉化至漢遜酵母基因組中.結果:所有重組質粒經 PCR和酶切鑒定均齣現目的片段,測序結果證實正確,目的基因ORF5、ORF6與酵母重組成功.結論:構建瞭含有目的基因ORF5、ORF6的重組酵母工程菌,為實現分泌錶達目的蛋白 ,進而研製病毒亞單位疫苗及診斷試劑提供瞭物質基礎.
목적:구건마동맥염병독독마광ORF5、ORF6、ORF7주요결구단백기인전장편단적극륭재체급한손효모천사재체,병획득중조공정균,위하일보효모표체중조목적단백전정기출.방법:응용RT-PCR방법종병독핵산중확증ORF5、ORF6화ORF7독마광적전장기인,산물회수후분별여PUC18화PMD18-T재체련접병전화DH5α E.coli,경안변사선급측서,건립극륭재체PUC18-GL、PUC18-M화PMD18T-ORF7;이구건적극륭재체위모판,용중신설계적인물구건료한손효모분비성천사재체,연후전전화지한손효모기인조중.결과:소유중조질립경 PCR화매절감정균출현목적편단,측서결과증실정학,목적기인ORF5、ORF6여효모중조성공.결론:구건료함유목적기인ORF5、ORF6적중조효모공정균,위실현분비표체목적단백 ,진이연제병독아단위역묘급진단시제제공료물질기출.
