生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2006年
4期
572-580
,共9页
姚宁%姚伦广%阚云超%周文科%齐义鹏
姚寧%姚倫廣%闞雲超%週文科%齊義鵬
요저%요륜엄%감운초%주문과%제의붕
Bac-to-Bac系统%位点特异性重组%绿色荧光蛋白示踪%白介素-6
Bac-to-Bac繫統%位點特異性重組%綠色熒光蛋白示蹤%白介素-6
Bac-to-Bac계통%위점특이성중조%록색형광단백시종%백개소-6
使用同源重组方法,在昆虫细胞内将多角体启动子驱动的EGFP表达盒插入杆状病毒穿梭载体Bacmid的p74位相,经5轮空斑纯化获得重组穿梭载体Bacmid-egfp.然后将Bacmid-egfp转化含转座助手质粒的E.coli DH10B,获得受体菌E.coliDH10Bac-egfp,由于Bacmid-egfp保留了完整的转座结构和α互补功能,因此该菌株和原始E.coli DH10Bac一样能有效的利用各种pFastBac系列的载体进行转座并构建出能指示病毒繁殖和目的基因表达的重组病毒.使用红色荧光蛋白DsRed对系统进行了验证,结果表明重组病毒Bac-egfp-DsRed感染的细胞中绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白均得到了高效表达.进一步使用该系统在昆虫细胞中高效表达并纯化了IL-6蛋白,为研究和应用该细胞因子提供物质基础,同时也进一步证明所改造的杆状病毒表达系统的可靠性和实用性.
使用同源重組方法,在昆蟲細胞內將多角體啟動子驅動的EGFP錶達盒插入桿狀病毒穿梭載體Bacmid的p74位相,經5輪空斑純化穫得重組穿梭載體Bacmid-egfp.然後將Bacmid-egfp轉化含轉座助手質粒的E.coli DH10B,穫得受體菌E.coliDH10Bac-egfp,由于Bacmid-egfp保留瞭完整的轉座結構和α互補功能,因此該菌株和原始E.coli DH10Bac一樣能有效的利用各種pFastBac繫列的載體進行轉座併構建齣能指示病毒繁殖和目的基因錶達的重組病毒.使用紅色熒光蛋白DsRed對繫統進行瞭驗證,結果錶明重組病毒Bac-egfp-DsRed感染的細胞中綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白均得到瞭高效錶達.進一步使用該繫統在昆蟲細胞中高效錶達併純化瞭IL-6蛋白,為研究和應用該細胞因子提供物質基礎,同時也進一步證明所改造的桿狀病毒錶達繫統的可靠性和實用性.
사용동원중조방법,재곤충세포내장다각체계동자구동적EGFP표체합삽입간상병독천사재체Bacmid적p74위상,경5륜공반순화획득중조천사재체Bacmid-egfp.연후장Bacmid-egfp전화함전좌조수질립적E.coli DH10B,획득수체균E.coliDH10Bac-egfp,유우Bacmid-egfp보류료완정적전좌결구화α호보공능,인차해균주화원시E.coli DH10Bac일양능유효적이용각충pFastBac계렬적재체진행전좌병구건출능지시병독번식화목적기인표체적중조병독.사용홍색형광단백DsRed대계통진행료험증,결과표명중조병독Bac-egfp-DsRed감염적세포중록색형광단백화홍색형광단백균득도료고효표체.진일보사용해계통재곤충세포중고효표체병순화료IL-6단백,위연구화응용해세포인자제공물질기출,동시야진일보증명소개조적간상병독표체계통적가고성화실용성.
