CAJ | 학술논문

对DD-RTPCR获得的差异显示片段C15进行地高辛标记后作为探针,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从0.8×104个重组噬菌体中,经过2轮筛选获得阳性克隆DM7.测序分析表明,该阳性克隆长1 097 bp,具有完整的开放阅读框架,为编码鲤鱼蛋白酶体激活因子PA28的全长cDNA,编码249个氨基酸,含有PA28的α和β亚单位功能结构域,与已报道的斑马鱼的蛋白酶体激活因子PA28的同源性达93%.分离鲤鱼外周血白细胞,经有丝分裂原在不同条件下刺激后,利用Trizol提取总RNA,根据得到的PA28全长cDNA序列和鲤鱼β-actin的序列,设计引物,采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定白细胞中PA28基因mRNA表达量的变化.结果表明,白细胞经LPS、ConA刺激后,PA28基因的mRNA表达量有所增加,但并不随时间的延长而持续增加.
대DD-RTPCR획득적차이현시편단C15진행지고신표기후작위탐침,대유사분렬원자격적리어외주혈백세포cDNA문고진행핵산잡교사선,종0.8×104개중조서균체중,경과2륜사선획득양성극륭DM7.측서분석표명,해양성극륭장1 097 bp,구유완정적개방열독광가,위편마리어단백매체격활인자PA28적전장cDNA,편마249개안기산,함유PA28적α화β아단위공능결구역,여이보도적반마어적단백매체격활인자PA28적동원성체93%.분리리어외주혈백세포,경유사분렬원재불동조건하자격후,이용Trizol제취총RNA,근거득도적PA28전장cDNA서렬화리어β-actin적서렬,설계인물,채용반정량반전록취합매련반응(RT-PCR)방법측정백세포중PA28기인mRNA표체량적변화.결과표명,백세포경LPS、ConA자격후,PA28기인적mRNA표체량유소증가,단병불수시간적연장이지속증가.