生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2007年
1期
93-99
,共7页
钟英成%石爽%张颖妹%莫晓宁%刘大振%宋泉声%韩文玲%王应
鐘英成%石爽%張穎妹%莫曉寧%劉大振%宋泉聲%韓文玲%王應
종영성%석상%장영매%막효저%류대진%송천성%한문령%왕응
趋化素样因子超家族成员-2%重组蛋白纯化%多克隆抗体%趋化%免疫组织化学%抗体中和作用
趨化素樣因子超傢族成員-2%重組蛋白純化%多剋隆抗體%趨化%免疫組織化學%抗體中和作用
추화소양인자초가족성원-2%중조단백순화%다극륭항체%추화%면역조직화학%항체중화작용
哺乳动物细胞表达的人类新细胞因子--趋化素样因子超家族成员-2(CKLFSF2)存在分泌形式,位于CKLFSF2分子的羧基端,具有细胞趋化作用.为进一步研究CKLFSF2羧基端蛋白的结构和生物学功能及抗体制备,构建了GST-CKLFSF2C51原核表达质粒,经原核表达、亲和层析、凝胶过滤,获得GST-CKLFSF2 C51融合蛋白和CKLFSF2羧基端蛋白(CKLFSF2 C51),纯度可达到95%以上.GST-CKLFSF2 C51融合蛋白用于制备多克隆抗体,ELISA方法检测抗体效价阳性,蛋白质印迹检测CKLFSF2哺乳动物细胞超表达细胞裂解液,获得特异性条带与预期大小一致.CKLFSF2 C51经N端测序,质谱鉴定与预期结果一致,该蛋白质具有对PC-3细胞趋化的活性,并且该活性可被制备的多克隆抗体中和.上述结果表明,原核CKLFSF2羧基端蛋白具有与CKLFSF2真核表达蛋白类似的细胞趋化活性,原核CKLFSF2羧基端蛋白制备的多克隆抗体可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测,并能中和CKLFSF2蛋白的趋化活性作用.
哺乳動物細胞錶達的人類新細胞因子--趨化素樣因子超傢族成員-2(CKLFSF2)存在分泌形式,位于CKLFSF2分子的羧基耑,具有細胞趨化作用.為進一步研究CKLFSF2羧基耑蛋白的結構和生物學功能及抗體製備,構建瞭GST-CKLFSF2C51原覈錶達質粒,經原覈錶達、親和層析、凝膠過濾,穫得GST-CKLFSF2 C51融閤蛋白和CKLFSF2羧基耑蛋白(CKLFSF2 C51),純度可達到95%以上.GST-CKLFSF2 C51融閤蛋白用于製備多剋隆抗體,ELISA方法檢測抗體效價暘性,蛋白質印跡檢測CKLFSF2哺乳動物細胞超錶達細胞裂解液,穫得特異性條帶與預期大小一緻.CKLFSF2 C51經N耑測序,質譜鑒定與預期結果一緻,該蛋白質具有對PC-3細胞趨化的活性,併且該活性可被製備的多剋隆抗體中和.上述結果錶明,原覈CKLFSF2羧基耑蛋白具有與CKLFSF2真覈錶達蛋白類似的細胞趨化活性,原覈CKLFSF2羧基耑蛋白製備的多剋隆抗體可用于免疫組織化學、蛋白質印跡檢測,併能中和CKLFSF2蛋白的趨化活性作用.
포유동물세포표체적인류신세포인자--추화소양인자초가족성원-2(CKLFSF2)존재분비형식,위우CKLFSF2분자적최기단,구유세포추화작용.위진일보연구CKLFSF2최기단단백적결구화생물학공능급항체제비,구건료GST-CKLFSF2C51원핵표체질립,경원핵표체、친화층석、응효과려,획득GST-CKLFSF2 C51융합단백화CKLFSF2최기단단백(CKLFSF2 C51),순도가체도95%이상.GST-CKLFSF2 C51융합단백용우제비다극륭항체,ELISA방법검측항체효개양성,단백질인적검측CKLFSF2포유동물세포초표체세포렬해액,획득특이성조대여예기대소일치.CKLFSF2 C51경N단측서,질보감정여예기결과일치,해단백질구유대PC-3세포추화적활성,병차해활성가피제비적다극륭항체중화.상술결과표명,원핵CKLFSF2최기단단백구유여CKLFSF2진핵표체단백유사적세포추화활성,원핵CKLFSF2최기단단백제비적다극륭항체가용우면역조직화학、단백질인적검측,병능중화CKLFSF2단백적추화활성작용.
