中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2008年
1期
69-77
,共9页
小鼠受精卵%蛋白激酶A%细胞分裂周期25B%有丝分裂促进因子
小鼠受精卵%蛋白激酶A%細胞分裂週期25B%有絲分裂促進因子
소서수정란%단백격매A%세포분렬주기25B%유사분렬촉진인자
为了观察Cdc25B蛋白及PKA/Cdc25B信号途径在小鼠受精卵发育中的作用,将突变型和野生型Cdc25b转录成mRNA,显微注射到小鼠受精卵中,放入含有或不含有dbcAMP的M16中,相差显微镜下观察受精卵卵裂情况;用蛋白激酶活性测定方法检测MPF的活性;利用Western印迹检测Cdc2-Tyr15的磷酸化状态.结果显示,未加dbcAMP的Cdc25b-S321A mRNA注射组与Cdc25b-WT组相比,能够提前使受精卵发生G2/M期转变,导致卵裂,并明显提高卵裂率;MPF的活性测定和Cdc2-Tyr15磷酸化状态的检测结果也显示,Cdc25b-S321A组先于Cdc25b-WT组提前激活MPF.此外,Cdc25 b-S321A mRNA注射组可以有效恢复由PKA引起的受精卵G2期阻滞,显著增加卵裂率;MPF的活性测定和Cdc2-Tyr15磷酸化状态的检测结果也显示,在PKA持续激活的情况下,对比于Cdc25b-WT组,Cdc25 b-S321A组提前激活MPF.因此,在小鼠受精卵发育过程中PKA主要通过磷酸化Cdc25B的321位丝氨酸,从而调控MPF的激活与失活来控制有丝分裂进程.
為瞭觀察Cdc25B蛋白及PKA/Cdc25B信號途徑在小鼠受精卵髮育中的作用,將突變型和野生型Cdc25b轉錄成mRNA,顯微註射到小鼠受精卵中,放入含有或不含有dbcAMP的M16中,相差顯微鏡下觀察受精卵卵裂情況;用蛋白激酶活性測定方法檢測MPF的活性;利用Western印跡檢測Cdc2-Tyr15的燐痠化狀態.結果顯示,未加dbcAMP的Cdc25b-S321A mRNA註射組與Cdc25b-WT組相比,能夠提前使受精卵髮生G2/M期轉變,導緻卵裂,併明顯提高卵裂率;MPF的活性測定和Cdc2-Tyr15燐痠化狀態的檢測結果也顯示,Cdc25b-S321A組先于Cdc25b-WT組提前激活MPF.此外,Cdc25 b-S321A mRNA註射組可以有效恢複由PKA引起的受精卵G2期阻滯,顯著增加卵裂率;MPF的活性測定和Cdc2-Tyr15燐痠化狀態的檢測結果也顯示,在PKA持續激活的情況下,對比于Cdc25b-WT組,Cdc25 b-S321A組提前激活MPF.因此,在小鼠受精卵髮育過程中PKA主要通過燐痠化Cdc25B的321位絲氨痠,從而調控MPF的激活與失活來控製有絲分裂進程.
위료관찰Cdc25B단백급PKA/Cdc25B신호도경재소서수정란발육중적작용,장돌변형화야생형Cdc25b전록성mRNA,현미주사도소서수정란중,방입함유혹불함유dbcAMP적M16중,상차현미경하관찰수정란란렬정황;용단백격매활성측정방법검측MPF적활성;이용Western인적검측Cdc2-Tyr15적린산화상태.결과현시,미가dbcAMP적Cdc25b-S321A mRNA주사조여Cdc25b-WT조상비,능구제전사수정란발생G2/M기전변,도치란렬,병명현제고란렬솔;MPF적활성측정화Cdc2-Tyr15린산화상태적검측결과야현시,Cdc25b-S321A조선우Cdc25b-WT조제전격활MPF.차외,Cdc25 b-S321A mRNA주사조가이유효회복유PKA인기적수정란G2기조체,현저증가란렬솔;MPF적활성측정화Cdc2-Tyr15린산화상태적검측결과야현시,재PKA지속격활적정황하,대비우Cdc25b-WT조,Cdc25 b-S321A조제전격활MPF.인차,재소서수정란발육과정중PKA주요통과린산화Cdc25B적321위사안산,종이조공MPF적격활여실활래공제유사분렬진정.
