CAJ | 학술논문

目的构建小鼠β-防御素6(mBD6)与甲型流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)真核表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达与免疫特性.方法通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将M2e与mBD6通过一段多肽接头Gly4Ser融合成为mBD6-M2e.将其插入戢体pcDNA3.1(+),构建成pcDNA3.1(+)/mBD6-M2e.鉴定正确后,转染MDCK细胞,免疫荧光、MTT检测mBD6-M2e表达和分泌.免疫小鼠,半定量PCR检测脾细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α、CCR7表达.结果融合基因mBD6-M2e真核表达栽体pcDNA3.1(+)/mBD6-M2e构建成功,在MDCK细胞膜上成功表达融和蛋白,转染细胞的培养上清刺激淋巴细胞增殖.免疫小鼠细胞因子表达改变.结论融合基因mBD6-M2e真核表达栽体成功构建,为研究防御素在流感病毒核酸疫苗中的佐剂作用奠定了基础.
목적 구건소서β-방어소6(mBD6)여갑형류감병독M2단백포외공능구(M2e)진핵표체질립,병연구기재진핵세포중적표체여면역특성.방법 통과중첩연신PCR법(overlap-PCR)장M2e여mBD6통과일단다태접두Gly4Ser융합성위mBD6-M2e.장기삽입집체pcDNA3.1(+),구건성pcDNA3.1(+)/mBD6-M2e.감정정학후,전염MDCK세포,면역형광、MTT검측mBD6-M2e표체화분비.면역소서,반정량PCR검측비세포인자IL-2、IFN-γ、TNF-α、CCR7표체.결과 융합기인mBD6-M2e진핵표체재체pcDNA3.1(+)/mBD6-M2e구건성공,재MDCK세포막상성공표체융화단백,전염세포적배양상청자격림파세포증식.면역소서세포인자표체개변.결론 융합기인mBD6-M2e진핵표체재체성공구건,위연구방어소재류감병독핵산역묘중적좌제작용전정료기출.