河北农业大学学报
河北農業大學學報
하북농업대학학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL UNIVERSITY OF HEBEI
2010年
4期
89-93
,共5页
程晓亮%纪莉景%王连生%栗秋生%朱杰华%孔令晓
程曉亮%紀莉景%王連生%慄鞦生%硃傑華%孔令曉
정효량%기리경%왕련생%률추생%주걸화%공령효
土壤微生物%镰刀菌%PCR-DGGE%优化
土壤微生物%鐮刀菌%PCR-DGGE%優化
토양미생물%렴도균%PCR-DGGE%우화
本试验比较了4种提取小麦-玉米轮作免耕田土壤DNA的方法,并对巢式PCR反应体系和扩增条件进行了优化,建立了适合检测土壤中镰刀菌多样性的PCR-DGGE体系.结果表明:土壤DNA的质量是影响PCR扩增结果的关键因子,试剂盒Fast DNA SPIN for Soil 所提土壤DNA片段接近23 bp,A260 /A280比值为1.84,DNA产量为18.1 μg/g,更适合进行PCR反应.DNA模板的浓度决定PCR扩增结果,第一轮PCR扩增的DNA模板适宜量为2～5 ng,以第一轮PCR产物的原液为模板进行第二轮PCR扩增,在退火温度为67 ℃时扩增结果最好.PCR产物在变性范围为45%～60%的丙烯酰胺梯度凝胶中电泳7～8 h,其条带能够完全分离,可以用作土壤中镰刀菌多样性的检测.
本試驗比較瞭4種提取小麥-玉米輪作免耕田土壤DNA的方法,併對巢式PCR反應體繫和擴增條件進行瞭優化,建立瞭適閤檢測土壤中鐮刀菌多樣性的PCR-DGGE體繫.結果錶明:土壤DNA的質量是影響PCR擴增結果的關鍵因子,試劑盒Fast DNA SPIN for Soil 所提土壤DNA片段接近23 bp,A260 /A280比值為1.84,DNA產量為18.1 μg/g,更適閤進行PCR反應.DNA模闆的濃度決定PCR擴增結果,第一輪PCR擴增的DNA模闆適宜量為2～5 ng,以第一輪PCR產物的原液為模闆進行第二輪PCR擴增,在退火溫度為67 ℃時擴增結果最好.PCR產物在變性範圍為45%～60%的丙烯酰胺梯度凝膠中電泳7～8 h,其條帶能夠完全分離,可以用作土壤中鐮刀菌多樣性的檢測.
본시험비교료4충제취소맥-옥미륜작면경전토양DNA적방법,병대소식PCR반응체계화확증조건진행료우화,건립료괄합검측토양중렴도균다양성적PCR-DGGE체계.결과표명:토양DNA적질량시영향PCR확증결과적관건인자,시제합Fast DNA SPIN for Soil 소제토양DNA편단접근23 bp,A260 /A280비치위1.84,DNA산량위18.1 μg/g,경괄합진행PCR반응.DNA모판적농도결정PCR확증결과,제일륜PCR확증적DNA모판괄의량위2～5 ng,이제일륜PCR산물적원액위모판진행제이륜PCR확증,재퇴화온도위67 ℃시확증결과최호.PCR산물재변성범위위45%～60%적병희선알제도응효중전영7～8 h,기조대능구완전분리,가이용작토양중렴도균다양성적검측.
