基因组学与应用生物学
基因組學與應用生物學
기인조학여응용생물학
GENOMICS AND APPLIED BIOLOGY
2011年
5期
556-563
,共8页
周兴%韦星明%杨祥开%郑元涛%庞浩%许黎明%黄日波
週興%韋星明%楊祥開%鄭元濤%龐浩%許黎明%黃日波
주흥%위성명%양상개%정원도%방호%허려명%황일파
蔗糖异构酶%定点突变%产物特异性%大黄欧文氏菌
蔗糖異構酶%定點突變%產物特異性%大黃歐文氏菌
자당이구매%정점돌변%산물특이성%대황구문씨균
大黄欧文氏菌(Erwinia rhapontici)蔗糖异构酶催化蔗糖异构为异麦芽酮糖和海藻酮糖,具有一个可能控制产物特异性的325RLDRD329基序.本研究以定点突变方法对该基序的带电荷氨基酸进行突变,共构建R325D、R328A、R328D、R328Q和D329N 5个突变体.通过对突变体的酶学特性及突变体转化蔗糖的产物组成分析,结果显示所构建突变体的Km值上升约2~5倍,比活力下降至野生型SI比活力的11.8%~25.3%.HPLC分析显示Arg325和Arg328分别突变为Asp,导致产物中异麦芽酮糖/海藻酮糖的比例从6.93分别降至0.96和2.92,并伴随一个未知寡糖出现.Arg328突变为Ala和Gln同样导致反应产物中海藻酮糖比例上升,异麦芽酮糖比例下降.但是突变体D329N反应产物比例没有变化.以上结果表明325RLDRD329基序对大黄欧文氏菌蔗糖异构酶的酶活具有重要作用,并对酶的产物特异性产生影响.本研究结果将为该酶的作用机理研究奠定基础.
大黃歐文氏菌(Erwinia rhapontici)蔗糖異構酶催化蔗糖異構為異麥芽酮糖和海藻酮糖,具有一箇可能控製產物特異性的325RLDRD329基序.本研究以定點突變方法對該基序的帶電荷氨基痠進行突變,共構建R325D、R328A、R328D、R328Q和D329N 5箇突變體.通過對突變體的酶學特性及突變體轉化蔗糖的產物組成分析,結果顯示所構建突變體的Km值上升約2~5倍,比活力下降至野生型SI比活力的11.8%~25.3%.HPLC分析顯示Arg325和Arg328分彆突變為Asp,導緻產物中異麥芽酮糖/海藻酮糖的比例從6.93分彆降至0.96和2.92,併伴隨一箇未知寡糖齣現.Arg328突變為Ala和Gln同樣導緻反應產物中海藻酮糖比例上升,異麥芽酮糖比例下降.但是突變體D329N反應產物比例沒有變化.以上結果錶明325RLDRD329基序對大黃歐文氏菌蔗糖異構酶的酶活具有重要作用,併對酶的產物特異性產生影響.本研究結果將為該酶的作用機理研究奠定基礎.
대황구문씨균(Erwinia rhapontici)자당이구매최화자당이구위이맥아동당화해조동당,구유일개가능공제산물특이성적325RLDRD329기서.본연구이정점돌변방법대해기서적대전하안기산진행돌변,공구건R325D、R328A、R328D、R328Q화D329N 5개돌변체.통과대돌변체적매학특성급돌변체전화자당적산물조성분석,결과현시소구건돌변체적Km치상승약2~5배,비활력하강지야생형SI비활력적11.8%~25.3%.HPLC분석현시Arg325화Arg328분별돌변위Asp,도치산물중이맥아동당/해조동당적비례종6.93분별강지0.96화2.92,병반수일개미지과당출현.Arg328돌변위Ala화Gln동양도치반응산물중해조동당비례상승,이맥아동당비례하강.단시돌변체D329N반응산물비례몰유변화.이상결과표명325RLDRD329기서대대황구문씨균자당이구매적매활구유중요작용,병대매적산물특이성산생영향.본연구결과장위해매적작용궤리연구전정기출.
