CAJ | 학술논문

目的运用实时定量PCR(Real-time PCR)检测结核分枝杆菌耐异烟肼菌株和敏感株Ag85B、38kDa及MPT64编码基因(fbpB、psts1、mpt64)的mRNA表达水平,探讨结核分枝杆菌耐异烟肼株和敏感株的蛋白抗原在转录水平的差异性.方法根据GenBank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1、mpt64及内参基因Siga的特异引物,将fbpB、psts1、mpt64及Siga扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB、psts1、mpt64的实时定量PCR方法,并应用此方法检测22株耐异烟肼菌株及25株敏感菌株(含H37Rv标准株)中fbpB、psts1、mpt64的mRNA表达水平.结果耐异烟肼菌株的fbpB表达水平为0.65±0.22,敏感菌株的表达水平为0.36±0.13,两者有显著性差异(t=5.683,P＜0.01).耐异烟肼菌株的psts表达水平为13.63±4.16,敏感菌株的表达水平为9.86±2.79,两者差异有统计学意义(t=3.869,P＜0.01).耐异烟肼菌株的mpt64表达水平为5.89±3.22,敏感菌株的表达水平为7.67±4.52,差异无统计学意义(t=1.552,P＞0.05).结论成功建立了fbpB、psts1、mpt64基因的实时定量检测方法,检测显示耐异烟肼菌株的fbpB、psts1基因的mRNA表达水平显著高于敏感菌株,可能为耐异烟肼MTB的实验室诊断提供分子标识.
목적 운용실시정량PCR(Real-time PCR)검측결핵분지간균내이연정균주화민감주Ag85B、38kDa급MPT64편마기인(fbpB、psts1、mpt64)적mRNA표체수평,탐토결핵분지간균내이연정주화민감주적단백항원재전록수평적차이성.방법 근거GenBank제공적서렬,설계목적기인fbpB、psts1、mpt64급내삼기인Siga적특이인물,장fbpB、psts1、mpt64급Siga확증편단극륭입재체pMD18-T simple,중조질립경순화급배비희석,응용SYBR GreenⅠ형광염료건립검측fbpB、psts1、mpt64적실시정량PCR방법,병응용차방법검측22주내이연정균주급25주민감균주(함H37Rv표준주)중fbpB、psts1、mpt64적mRNA표체수평.결과내이연정균주적fbpB표체수평위0.65±0.22,민감균주적표체수평위0.36±0.13,량자유현저성차이(t=5.683,P＜0.01).내이연정균주적psts표체수평위13.63±4.16,민감균주적표체수평위9.86±2.79,량자차이유통계학의의(t=3.869,P＜0.01).내이연정균주적mpt64표체수평위5.89±3.22,민감균주적표체수평위7.67±4.52,차이무통계학의의(t=1.552,P＞0.05).결론 성공건립료fbpB、psts1、mpt64기인적실시정량검측방법,검측현시내이연정균주적fbpB、psts1기인적mRNA표체수평현저고우민감균주,가능위내이연정MTB적실험실진단제공분자표식.