广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2012年
18期
2725-2727
,共3页
蔡春林%姚相杰%赵洁玲%卓菲%黎剑华
蔡春林%姚相傑%趙潔玲%卓菲%黎劍華
채춘림%요상걸%조길령%탁비%려검화
肠道病毒71型%杆状病毒%类病毒颗粒%疫苗
腸道病毒71型%桿狀病毒%類病毒顆粒%疫苗
장도병독71형%간상병독%류병독과립%역묘
目的 通过克隆EV71病毒结构前体蛋白P1和非结构蛋白3CD,构建共表达P1前体蛋白和非结构蛋白3CD的重组杆状病毒表达载体.方法 设计合成EMCV病毒IRES序列的特异性引物,克隆至含有CMV启动子的杆状病毒穿梭载体pFastBacDual-CMV上,命名为pFBCMV-IRES.从手足口病重症患者分离EV71病毒株,经RT-PCR技术分别扩增出EV71病毒的P1前体蛋白区与3CD区的片段,定向克隆至杆状病毒穿梭载体pFBCMV-IRES的IRES序列的上游和下游,随后转化到大肠杆菌DH5α中,经PCR和双酶切鉴定转化菌落.结果 通过对重组杆状病毒穿梭载体pFBCMV-IRES-P1-3CD进行酶切和DNA序列分析,证明共表达EV71病毒P1和3CD基因的重组杆状病毒双顺反子穿梭载体构建成功.结论 共表达EV71病毒P1和3CD基因重组杆状病毒双顺反子穿梭载体的成功构建,将为下一步制备EV71病毒的类病毒颗粒疫苗打下基础.
目的 通過剋隆EV71病毒結構前體蛋白P1和非結構蛋白3CD,構建共錶達P1前體蛋白和非結構蛋白3CD的重組桿狀病毒錶達載體.方法 設計閤成EMCV病毒IRES序列的特異性引物,剋隆至含有CMV啟動子的桿狀病毒穿梭載體pFastBacDual-CMV上,命名為pFBCMV-IRES.從手足口病重癥患者分離EV71病毒株,經RT-PCR技術分彆擴增齣EV71病毒的P1前體蛋白區與3CD區的片段,定嚮剋隆至桿狀病毒穿梭載體pFBCMV-IRES的IRES序列的上遊和下遊,隨後轉化到大腸桿菌DH5α中,經PCR和雙酶切鑒定轉化菌落.結果 通過對重組桿狀病毒穿梭載體pFBCMV-IRES-P1-3CD進行酶切和DNA序列分析,證明共錶達EV71病毒P1和3CD基因的重組桿狀病毒雙順反子穿梭載體構建成功.結論 共錶達EV71病毒P1和3CD基因重組桿狀病毒雙順反子穿梭載體的成功構建,將為下一步製備EV71病毒的類病毒顆粒疫苗打下基礎.
목적 통과극륭EV71병독결구전체단백P1화비결구단백3CD,구건공표체P1전체단백화비결구단백3CD적중조간상병독표체재체.방법 설계합성EMCV병독IRES서렬적특이성인물,극륭지함유CMV계동자적간상병독천사재체pFastBacDual-CMV상,명명위pFBCMV-IRES.종수족구병중증환자분리EV71병독주,경RT-PCR기술분별확증출EV71병독적P1전체단백구여3CD구적편단,정향극륭지간상병독천사재체pFBCMV-IRES적IRES서렬적상유화하유,수후전화도대장간균DH5α중,경PCR화쌍매절감정전화균락.결과 통과대중조간상병독천사재체pFBCMV-IRES-P1-3CD진행매절화DNA서렬분석,증명공표체EV71병독P1화3CD기인적중조간상병독쌍순반자천사재체구건성공.결론 공표체EV71병독P1화3CD기인중조간상병독쌍순반자천사재체적성공구건,장위하일보제비EV71병독적류병독과립역묘타하기출.
