实验生物学报
實驗生物學報
실험생물학보
ACTA BIOLOGIAE EXPERIMENTLIS SINICA
2003年
2期
130-136
,共7页
聂志妍%卢步峰%徐燕萍%卢波%郭礼和
聶誌妍%盧步峰%徐燕萍%盧波%郭禮和
섭지연%로보봉%서연평%로파%곽례화
酵母人工染色体%减数分裂%同源重组%人免疫球蛋白κ轻链
酵母人工染色體%減數分裂%同源重組%人免疫毬蛋白κ輕鏈
효모인공염색체%감수분렬%동원중조%인면역구단백κ경련
具有同源重叠区的酵母人工染色体(YAC)可以利用酵母细胞减数分裂进行同源重组,从而构建更大的人工染色体基因组,这对生命科学基础研究和生物技术应用研究有着非常重要的意义.本实验以两个含人免疫球蛋白κ链基因簇片段的YAC克隆为材料,通过酵母改型、异型接合、二倍体发孢、单孢子筛选和分子生物学鉴定等技术和方法,利用酵母菌减数分裂同源重组机制,构建了一条包含人的免疫球蛋白κ轻链32个Vκ基因、5个Jκ基因、Cκ基因、Eκ基因和κde基因的YAC重组体,长度约400kb.同时,本实验利用溶壁酶消化法获取单孢子重组体,代替了传统的显微分孢操作.使得利用酵母人工染色体减数分裂同源重组的技术更加简便可行.
具有同源重疊區的酵母人工染色體(YAC)可以利用酵母細胞減數分裂進行同源重組,從而構建更大的人工染色體基因組,這對生命科學基礎研究和生物技術應用研究有著非常重要的意義.本實驗以兩箇含人免疫毬蛋白κ鏈基因簇片段的YAC剋隆為材料,通過酵母改型、異型接閤、二倍體髮孢、單孢子篩選和分子生物學鑒定等技術和方法,利用酵母菌減數分裂同源重組機製,構建瞭一條包含人的免疫毬蛋白κ輕鏈32箇Vκ基因、5箇Jκ基因、Cκ基因、Eκ基因和κde基因的YAC重組體,長度約400kb.同時,本實驗利用溶壁酶消化法穫取單孢子重組體,代替瞭傳統的顯微分孢操作.使得利用酵母人工染色體減數分裂同源重組的技術更加簡便可行.
구유동원중첩구적효모인공염색체(YAC)가이이용효모세포감수분렬진행동원중조,종이구건경대적인공염색체기인조,저대생명과학기출연구화생물기술응용연구유착비상중요적의의.본실험이량개함인면역구단백κ련기인족편단적YAC극륭위재료,통과효모개형、이형접합、이배체발포、단포자사선화분자생물학감정등기술화방법,이용효모균감수분렬동원중조궤제,구건료일조포함인적면역구단백κ경련32개Vκ기인、5개Jκ기인、Cκ기인、Eκ기인화κde기인적YAC중조체,장도약400kb.동시,본실험이용용벽매소화법획취단포자중조체,대체료전통적현미분포조작.사득이용효모인공염색체감수분렬동원중조적기술경가간편가행.
