CAJ | 학술논문

目的:克隆日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SjSDISP)全长编码基因,并对所获基因在大肠杆菌中进行表达.方法:根据基因库中SjSDISP对应的EST(BU804141)以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgt11多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR对SjSDISP基因不完整的3'端和5'端进行扩增、测序,用电子软件拼接成全长cDNA,将其克隆到表达载体pGEX-4T-1上,经琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶消化、PCR和测序鉴定后,选择阳性克隆进行表达及Western印迹分析.结果:获得1 071 bp全长cDNA,其理论推导为编码278个氨基酸残基的蛋白质.SjSDISP基因在大肠杆菌BL21中获得良好表达.该融合表达产物相对分子质量约为56 kD,且能被日本血吸虫成虫抗原免疫血清特异识别.结论:编码日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白全长cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达获得成功.
목적:극륭일본혈흡충호박산탈경매철류단백(SjSDISP)전장편마기인,병대소획기인재대장간균중진행표체.방법:근거기인고중SjSDISP대응적EST(BU804141)이급일본혈흡충성충cDNA문고재체λgt11다극륭위점린근핵감산서렬설계인물,이일본혈흡충성충cDNA문고위모판,채용묘식PCR대SjSDISP기인불완정적3'단화5'단진행확증、측서,용전자연건병접성전장cDNA,장기극륭도표체재체pGEX-4T-1상,경경지당응효전영、한제성내절매소화、PCR화측서감정후,선택양성극륭진행표체급Western인적분석.결과:획득1 071 bp전장cDNA,기이론추도위편마278개안기산잔기적단백질.SjSDISP기인재대장간균BL21중획득량호표체.해융합표체산물상대분자질량약위56 kD,차능피일본혈흡충성충항원면역혈청특이식별.결론:편마일본혈흡충호박산탈경매철류단백전장cDNA극륭급기재대장간균중적표체획득성공.