生物加工过程
生物加工過程
생물가공과정
CHINESE JOURNAL OF BIOPROCESS ENGINEERING
2006年
2期
46-50
,共5页
曹丹燕%李艳%张清%许琳%严明
曹丹燕%李豔%張清%許琳%嚴明
조단연%리염%장청%허림%엄명
酿酒酵母%GRE3基因%醛糖还原酶%克隆%表达
釀酒酵母%GRE3基因%醛糖還原酶%剋隆%錶達
양주효모%GRE3기인%철당환원매%극륭%표체
采用PCR技术以酿酒酵母CICC1747基因组DNA为模板扩增得到醛糖还原酶基因GRE3,插入到pET-15b载体的NdeⅠ和BamHⅠ酶切位点之间,构建了酿酒酵母醛糖还原酶原核表达载体pET-15b-GRE3.将该载体转化到大肠杆菌菌株Rosetta(DE3)中,重组菌株用IPTG诱导表达,采用紫外分光光度法测定醛糖还原酶活力,并对其表达条件进行初步优化.SDS-PAGE电泳结果显示在分子量约37 kD处有明显的特异性蛋白质条带.发酵液的比酶活最高为54.94mU/mg,与酿酒酵母野生菌株相比提高了近10倍.
採用PCR技術以釀酒酵母CICC1747基因組DNA為模闆擴增得到醛糖還原酶基因GRE3,插入到pET-15b載體的NdeⅠ和BamHⅠ酶切位點之間,構建瞭釀酒酵母醛糖還原酶原覈錶達載體pET-15b-GRE3.將該載體轉化到大腸桿菌菌株Rosetta(DE3)中,重組菌株用IPTG誘導錶達,採用紫外分光光度法測定醛糖還原酶活力,併對其錶達條件進行初步優化.SDS-PAGE電泳結果顯示在分子量約37 kD處有明顯的特異性蛋白質條帶.髮酵液的比酶活最高為54.94mU/mg,與釀酒酵母野生菌株相比提高瞭近10倍.
채용PCR기술이양주효모CICC1747기인조DNA위모판확증득도철당환원매기인GRE3,삽입도pET-15b재체적NdeⅠ화BamHⅠ매절위점지간,구건료양주효모철당환원매원핵표체재체pET-15b-GRE3.장해재체전화도대장간균균주Rosetta(DE3)중,중조균주용IPTG유도표체,채용자외분광광도법측정철당환원매활력,병대기표체조건진행초보우화.SDS-PAGE전영결과현시재분자량약37 kD처유명현적특이성단백질조대.발효액적비매활최고위54.94mU/mg,여양주효모야생균주상비제고료근10배.
