CAJ | 학술논문

目的:制备抗大豆Ⅱ号亚型钙调素(SCaM-2)单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法:从含有pSCaM-2的大肠杆菌BL21中, 提取并纯化SCaM-2.以其作为抗原免疫BALB/c小鼠后, 取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞经细胞融合、筛选及克隆化, 建立稳定分泌SCaM-2 mAb的杂交瘤细胞株, 并对抗SCaM-2 mAb进行鉴定.结果:经两次细胞融合, 共获得10株可稳定分泌抗SCaM-2 mAb的杂交瘤细胞株.对其中3株杂交瘤细胞制备的腹水mAb(6F11F3、 7C5E9、 7E10E2), 用间接ELISA及免疫印迹实验表明, 在高稀释度时, mAb 6F11F3可识别SCaM-1和SCaM-2, 而mAb 7C5E9和7E10E2可分别识别SCaM-4和SCaM-5.Ig亚类鉴定结果表明, mAb 6F11F3和7C5E9均为IgG2a, mAb 7E10E2为IgG1.相加实验的结果显示, mAb 6F11F3和7C5E9可能识别SCaM-2相同的抗原表位;而mAb 7E10E2可能识别不同的抗原表位.mAb 6F11F3对SCaM-2的亲和常数为(2.127±0.418)×106M-1, mAb 7C5E9对SCaM-4的亲和常数为(9.69±2.406)×106M-1, mAb 7E10E2对SCaM-5的亲和常数为(1.203±0.429)×107M-1.结论:制备了可识别不同SCaM亚型的mAb 6F11F3、 7C5E9及7E10E2, 为研究SCaM的特性及功能提供了重要的制剂.
목적:제비항대두Ⅱ호아형개조소(SCaM-2)단극륭항체(mAb)병진행초보감정.방법:종함유pSCaM-2적대장간균BL21중, 제취병순화SCaM-2.이기작위항원면역BALB/c소서후, 취기비세포여소서골수류세포경세포융합、사선급극륭화, 건립은정분비SCaM-2 mAb적잡교류세포주, 병대항SCaM-2 mAb진행감정.결과:경량차세포융합, 공획득10주가은정분비항SCaM-2 mAb적잡교류세포주.대기중3주잡교류세포제비적복수mAb(6F11F3、 7C5E9、 7E10E2), 용간접ELISA급면역인적실험표명, 재고희석도시, mAb 6F11F3가식별SCaM-1화SCaM-2, 이mAb 7C5E9화7E10E2가분별식별SCaM-4화SCaM-5.Ig아류감정결과표명, mAb 6F11F3화7C5E9균위IgG2a, mAb 7E10E2위IgG1.상가실험적결과현시, mAb 6F11F3화7C5E9가능식별SCaM-2상동적항원표위;이mAb 7E10E2가능식별불동적항원표위.mAb 6F11F3대SCaM-2적친화상수위(2.127±0.418)×106M-1, mAb 7C5E9대SCaM-4적친화상수위(9.69±2.406)×106M-1, mAb 7E10E2대SCaM-5적친화상수위(1.203±0.429)×107M-1.결론:제비료가식별불동SCaM아형적mAb 6F11F3、 7C5E9급7E10E2, 위연구SCaM적특성급공능제공료중요적제제.