上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2007年
2期
185-188
,共4页
β细胞素%克隆%表达载体%纯化蛋白质
β細胞素%剋隆%錶達載體%純化蛋白質
β세포소%극륭%표체재체%순화단백질
目的 获得大量具有生物活性的人成熟β细胞素(BTC)蛋白.方法 以人胰岛细胞瘤cDNA为模板,PCR扩增BTC基因成熟蛋白编码区的全部序列,并按读框克隆入原核细胞表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-hBTC.重组质粒转化大肠杆菌BL21,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导及亲和层析法纯化获得融合蛋白,运用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.以不同浓度BTC连续5 d作用于NIH3T3细胞,MTT比色法检测细胞增殖能力.结果 融合蛋白以水溶性形式分泌于大肠杆菌BL-21胞浆中,其作用于NIH3T3细胞可明显促进细胞增殖.结论 人成熟BTC蛋白在pET32a(+)表达系统中得到高效表达,所纯化蛋白具有促进NIH3T3细胞体外增殖的作用.
目的 穫得大量具有生物活性的人成熟β細胞素(BTC)蛋白.方法 以人胰島細胞瘤cDNA為模闆,PCR擴增BTC基因成熟蛋白編碼區的全部序列,併按讀框剋隆入原覈細胞錶達載體pET32a(+)中,構建重組質粒pET32a(+)-hBTC.重組質粒轉化大腸桿菌BL21,經異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導及親和層析法純化穫得融閤蛋白,運用SDS-PAGE和Western blot進行鑒定.以不同濃度BTC連續5 d作用于NIH3T3細胞,MTT比色法檢測細胞增殖能力.結果 融閤蛋白以水溶性形式分泌于大腸桿菌BL-21胞漿中,其作用于NIH3T3細胞可明顯促進細胞增殖.結論 人成熟BTC蛋白在pET32a(+)錶達繫統中得到高效錶達,所純化蛋白具有促進NIH3T3細胞體外增殖的作用.
목적 획득대량구유생물활성적인성숙β세포소(BTC)단백.방법 이인이도세포류cDNA위모판,PCR확증BTC기인성숙단백편마구적전부서렬,병안독광극륭입원핵세포표체재체pET32a(+)중,구건중조질립pET32a(+)-hBTC.중조질립전화대장간균BL21,경이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도급친화층석법순화획득융합단백,운용SDS-PAGE화Western blot진행감정.이불동농도BTC련속5 d작용우NIH3T3세포,MTT비색법검측세포증식능력.결과 융합단백이수용성형식분비우대장간균BL-21포장중,기작용우NIH3T3세포가명현촉진세포증식.결론 인성숙BTC단백재pET32a(+)표체계통중득도고효표체,소순화단백구유촉진NIH3T3세포체외증식적작용.
