CAJ | 학술논문

目的:应用分子生物学技术,构建pIHsp65GM双顺反子真核表达质粒,并在真核细胞中表达.方法:以结核分枝杆菌H37Rv株基因组为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因,同时从质粒pORF-hGM-CSF中扩增出基因佐剂hGM-CSF,分别克隆到真核表达载体pIRES的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建pIHsp65GM真核表达质粒,并转染HepG-2细胞中表达和检测.结果:酶切鉴定提示插入的基因片段大小分别为1.64 kb和0.47 kb,测序分析表明克隆的Hsp65和hGM-CSF序列与GenBank上公布序列完全一致;免疫组织化学方法检测到表达Hsp65的阳性细胞;ELISA方法检测到pIHsp65GM转染组细胞培养上清中hGM-CSF的表达,与空载体对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:成功构建和表达了pIHsp65GM质粒,为研制优于卡介苗的新型抗结核病DNA疫苗奠定基础.
목적:응용분자생물학기술,구건pIHsp65GM쌍순반자진핵표체질립,병재진핵세포중표체.방법:이결핵분지간균H37Rv주기인조위모판경취합매련반응(PCR)확증출Hsp65기인,동시종질립pORF-hGM-CSF중확증출기인좌제hGM-CSF,분별극륭도진핵표체재체pIRES적다극륭위점A(MCSA)화B(MCSB)중,구건pIHsp65GM진핵표체질립,병전염HepG-2세포중표체화검측.결과:매절감정제시삽입적기인편단대소분별위1.64 kb화0.47 kb,측서분석표명극륭적Hsp65화hGM-CSF서렬여GenBank상공포서렬완전일치;면역조직화학방법검측도표체Hsp65적양성세포;ELISA방법검측도pIHsp65GM전염조세포배양상청중hGM-CSF적표체,여공재체대조조비교차이유통계학의의(P＜0.01).결론:성공구건화표체료pIHsp65GM질립,위연제우우잡개묘적신형항결핵병DNA역묘전정기출.