华南预防医学
華南預防醫學
화남예방의학
SOUTH CHINA JOURNAL OF PREVENTIVE MEDICINE
2008年
1期
22-25,29
,共5页
陈华%谭翰清%郭赐贶%谭海芳%程洁萍%林凤%孔秀珍%丁丽娜
陳華%譚翰清%郭賜貺%譚海芳%程潔萍%林鳳%孔秀珍%丁麗娜
진화%담한청%곽사황%담해방%정길평%림봉%공수진%정려나
人类杯状病毒%诺如病毒%实时荧光PCR%逆转录PCR%TaqMan MGB探针
人類杯狀病毒%諾如病毒%實時熒光PCR%逆轉錄PCR%TaqMan MGB探針
인류배상병독%낙여병독%실시형광PCR%역전록PCR%TaqMan MGB탐침
目的 建立特异、灵敏的诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测方法.方法 根据GenBank诺如病毒遗传组Ⅱ型代表株保守序列设计特异引物对和TaqManMGB探针,调整引物、探针浓度,优化最佳反应条件,建立一步法实时荧光PCR快速检测反应体系,进行灵敏度、特异性、稳定性试验,以评价反应体系,并与引物P289/P290常规RT-PCR进行灵敏度比较.结果 诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测时限短,仅1h就出结果;最低检出下限为100拷贝/mL,比引物P 289/P 290常规RT-PCR灵敏度高100倍;与轮状病毒、腺病毒、星状病毒、甲肝病毒无交叉反应;4份核酸含量不同的标本重复检测5次,平均Ct值变异系数范围0.96%～2.27%.结论 诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速、特异、灵敏、稳定性好,可应用于突发公共卫生应急检测,提高快速检测能力.
目的 建立特異、靈敏的諾如病毒遺傳組Ⅱ型TaqMan-MGB探針實時熒光PCR快速檢測方法.方法 根據GenBank諾如病毒遺傳組Ⅱ型代錶株保守序列設計特異引物對和TaqManMGB探針,調整引物、探針濃度,優化最佳反應條件,建立一步法實時熒光PCR快速檢測反應體繫,進行靈敏度、特異性、穩定性試驗,以評價反應體繫,併與引物P289/P290常規RT-PCR進行靈敏度比較.結果 諾如病毒遺傳組Ⅱ型TaqMan-MGB探針實時熒光PCR檢測時限短,僅1h就齣結果;最低檢齣下限為100拷貝/mL,比引物P 289/P 290常規RT-PCR靈敏度高100倍;與輪狀病毒、腺病毒、星狀病毒、甲肝病毒無交扠反應;4份覈痠含量不同的標本重複檢測5次,平均Ct值變異繫數範圍0.96%～2.27%.結論 諾如病毒遺傳組Ⅱ型TaqMan-MGB探針實時熒光PCR快速、特異、靈敏、穩定性好,可應用于突髮公共衛生應急檢測,提高快速檢測能力.
목적 건립특이、령민적낙여병독유전조Ⅱ형TaqMan-MGB탐침실시형광PCR쾌속검측방법.방법 근거GenBank낙여병독유전조Ⅱ형대표주보수서렬설계특이인물대화TaqManMGB탐침,조정인물、탐침농도,우화최가반응조건,건립일보법실시형광PCR쾌속검측반응체계,진행령민도、특이성、은정성시험,이평개반응체계,병여인물P289/P290상규RT-PCR진행령민도비교.결과 낙여병독유전조Ⅱ형TaqMan-MGB탐침실시형광PCR검측시한단,부1h취출결과;최저검출하한위100고패/mL,비인물P 289/P 290상규RT-PCR령민도고100배;여륜상병독、선병독、성상병독、갑간병독무교차반응;4빈핵산함량불동적표본중복검측5차,평균Ct치변이계수범위0.96%～2.27%.결론 낙여병독유전조Ⅱ형TaqMan-MGB탐침실시형광PCR쾌속、특이、령민、은정성호,가응용우돌발공공위생응급검측,제고쾌속검측능력.
