CAJ | 학술논문

目的:组织工程人角膜内皮(tissue-engineered human corneal endothelia,TE-HCE)的体外重建及其形态结构.方法:用有限稀释法从HCE细胞系筛选出单克隆细胞(mcHCE细胞),用常规染色体标本制作和核型分类学方法进行核型分析.用羊膜的胰酶倒置消化和细胞外基质蛋白包被方法制备去上皮层修饰羊膜(mdAM).以核型正常的对数期mcHCE细胞为种子细胞,以平铺于24孔培养板孔底的mdAM为载体支架,用200mL/L胎牛血清-DMEM/F12培养液在37℃,50mL/L CO2培养箱中进行TE-HCE的体外重建.用茜素红染色、冰冻切片HE染色、倒置显微镜和扫描电镜观察种子细胞的形态、细胞连接的形成情况、细胞单层的完整性及其与mdAM结合的紧密程度.用透射电镜方法鉴定种子细胞的超微结构以及细胞连接的形成情况.用免疫荧光技术检测种子细胞对不同细胞连接蛋白的表达模式.结果:从非转染HCE细胞系中筛选出了7个核型正常(2n=46)的单克隆细胞株.在启动重建30h后,mcHCE种子细胞在mdAM上形成了完整的细胞单层,细胞密度高达3 413/mm2.HCE细胞呈多角形细胞形态,形成了完整的细胞单层,且在细胞-细胞以及细胞-mdAM间形成了多种细胞连接,种子细胞在超微结构上与在体HCE细胞类似,胞质中含有许多线粒体,并具有紧密连接蛋白-1、钙黏蛋白、间隙连接蛋白-43和整联蛋白αv/β5的阳性表达.结论:体外重建的TE-HCE在结构和功能上与在体HCE相似,有望作为HCE的替代物用于临床角膜内皮移植.
목적:조직공정인각막내피(tissue-engineered human corneal endothelia,TE-HCE)적체외중건급기형태결구.방법:용유한희석법종HCE세포계사선출단극륭세포(mcHCE세포),용상규염색체표본제작화핵형분류학방법진행핵형분석.용양막적이매도치소화화세포외기질단백포피방법제비거상피층수식양막(mdAM).이핵형정상적대수기mcHCE세포위충자세포,이평포우24공배양판공저적mdAM위재체지가,용200mL/L태우혈청-DMEM/F12배양액재37℃,50mL/L CO2배양상중진행TE-HCE적체외중건.용천소홍염색、빙동절편HE염색、도치현미경화소묘전경관찰충자세포적형태、세포련접적형성정황、세포단층적완정성급기여mdAM결합적긴밀정도.용투사전경방법감정충자세포적초미결구이급세포련접적형성정황.용면역형광기술검측충자세포대불동세포련접단백적표체모식.결과:종비전염HCE세포계중사선출료7개핵형정상(2n=46)적단극륭세포주.재계동중건30h후,mcHCE충자세포재mdAM상형성료완정적세포단층,세포밀도고체3 413/mm2.HCE세포정다각형세포형태,형성료완정적세포단층,차재세포-세포이급세포-mdAM간형성료다충세포련접,충자세포재초미결구상여재체HCE세포유사,포질중함유허다선립체,병구유긴밀련접단백-1、개점단백、간극련접단백-43화정련단백αv/β5적양성표체.결론:체외중건적TE-HCE재결구화공능상여재체HCE상사,유망작위HCE적체대물용우림상각막내피이식.