四川农业大学学报
四川農業大學學報
사천농업대학학보
JOURNAL OF SICHUAN AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
4期
549-554
,共6页
王淑娟%商艳红%陈红英%邵攀峰%刘金朋%朱前磊%王子馨%崔保安
王淑娟%商豔紅%陳紅英%邵攀峰%劉金朋%硃前磊%王子馨%崔保安
왕숙연%상염홍%진홍영%소반봉%류금붕%주전뢰%왕자형%최보안
传染性喉气管炎病毒(ILTV)%glycoprotein B(gB)%鸡Interleukin-18基因%真核表达%DNA疫苗
傳染性喉氣管炎病毒(ILTV)%glycoprotein B(gB)%鷄Interleukin-18基因%真覈錶達%DNA疫苗
전염성후기관염병독(ILTV)%glycoprotein B(gB)%계Interleukin-18기인%진핵표체%DNA역묘
将ILTV gB基因和鸡IL-18基因插入到真核双表达载体pIRES中,构建共表达gB和IL-18基因的重组质粒pIRES-gB/IL18和表达gB基因的pIRES-gB质粒.通过脂质体将其转染鸡胚成纤维细胞,利用RT-PCR及间接免疫荧光检测重组质粒在体外的表达.将重组质粒通过腿部肌肉多点注射免疫21日龄雏鸡,应用ELISA和流式细胞仪分别检测免疫鸡的体液免疫及细胞免疫水平.结果显示,pIRES-gB/IL18和pIRES-gB转染细胞中分别含gB/IL-18基因的mRNA和gB基因的mRNA.间接免疫荧光检测表明,pIRES-gB/IL18和pIRES-gB在CEF细胞中有效地转录并表达gB蛋白.pIRESgB/IL18和pIRES-gB免疫雏鸡后均能促进外周血T淋巴细胞亚群数量和血清中特异性抗体水平的增加,但前者的免疫效果明显优于后者,表明gB基因和鸡IL-18基因均获得了表达,且鸡IL-18能明显增强ILTV DNA疫苗诱发的免疫应答.
將ILTV gB基因和鷄IL-18基因插入到真覈雙錶達載體pIRES中,構建共錶達gB和IL-18基因的重組質粒pIRES-gB/IL18和錶達gB基因的pIRES-gB質粒.通過脂質體將其轉染鷄胚成纖維細胞,利用RT-PCR及間接免疫熒光檢測重組質粒在體外的錶達.將重組質粒通過腿部肌肉多點註射免疫21日齡雛鷄,應用ELISA和流式細胞儀分彆檢測免疫鷄的體液免疫及細胞免疫水平.結果顯示,pIRES-gB/IL18和pIRES-gB轉染細胞中分彆含gB/IL-18基因的mRNA和gB基因的mRNA.間接免疫熒光檢測錶明,pIRES-gB/IL18和pIRES-gB在CEF細胞中有效地轉錄併錶達gB蛋白.pIRESgB/IL18和pIRES-gB免疫雛鷄後均能促進外週血T淋巴細胞亞群數量和血清中特異性抗體水平的增加,但前者的免疫效果明顯優于後者,錶明gB基因和鷄IL-18基因均穫得瞭錶達,且鷄IL-18能明顯增彊ILTV DNA疫苗誘髮的免疫應答.
장ILTV gB기인화계IL-18기인삽입도진핵쌍표체재체pIRES중,구건공표체gB화IL-18기인적중조질립pIRES-gB/IL18화표체gB기인적pIRES-gB질립.통과지질체장기전염계배성섬유세포,이용RT-PCR급간접면역형광검측중조질립재체외적표체.장중조질립통과퇴부기육다점주사면역21일령추계,응용ELISA화류식세포의분별검측면역계적체액면역급세포면역수평.결과현시,pIRES-gB/IL18화pIRES-gB전염세포중분별함gB/IL-18기인적mRNA화gB기인적mRNA.간접면역형광검측표명,pIRES-gB/IL18화pIRES-gB재CEF세포중유효지전록병표체gB단백.pIRESgB/IL18화pIRES-gB면역추계후균능촉진외주혈T림파세포아군수량화혈청중특이성항체수평적증가,단전자적면역효과명현우우후자,표명gB기인화계IL-18기인균획득료표체,차계IL-18능명현증강ILTV DNA역묘유발적면역응답.
