肿瘤
腫瘤
종류
TUMOR
2006年
11期
979-983
,共5页
蔡幸%胡晶莹%莫忠根%朱明洁%赵新泰
蔡倖%鬍晶瑩%莫忠根%硃明潔%趙新泰
채행%호정형%막충근%주명길%조신태
钙磷脂结合蛋白类%杂交瘤%抗体,单克隆
鈣燐脂結閤蛋白類%雜交瘤%抗體,單剋隆
개린지결합단백류%잡교류%항체,단극륭
目的:制备抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体(mAb),对其进行特性鉴定,为在恶性肿瘤诊断和治疗中的应用打下基础.方法:构建膜联蛋白Ⅰ基因480 bp的原核表达载体pQE30 ANX Ⅰ,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,并用Ni NTA树脂亲和层析柱纯化蛋白.用纯化的膜联蛋白Ⅰ作为抗原免疫BAIB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化,制备抗膜联蛋白I蛋白的单克隆抗体,用ELISA、Western blot及免疫组织化学染色法进行特性鉴定.结果:获得5株分泌抗膜联蛋白Ⅰ mAb的杂交瘤细胞,分别命名为1A8、1D2、1E2、4E7和5G3,所产抗体,均为IgGl亚型,轻链均为κ链,亲和力为(2.3～3.03)×108L/mol.经Western blot证实获得的mAbs可以特异性识别膜联蛋白Ⅰ抗原;免疫组织化学染色结果也显示这些mAbs可以特异识别肿瘤组织中的膜联蛋白Ⅰ.结论:成功地获得了5株抗膜联蛋白I的mAbs,为进一步在肿瘤诊断和治疗中应用膜联蛋白Ⅰ抗体打下了基础.
目的:製備抗膜聯蛋白Ⅰ單剋隆抗體(mAb),對其進行特性鑒定,為在噁性腫瘤診斷和治療中的應用打下基礎.方法:構建膜聯蛋白Ⅰ基因480 bp的原覈錶達載體pQE30 ANX Ⅰ,異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導蛋白錶達,併用Ni NTA樹脂親和層析柱純化蛋白.用純化的膜聯蛋白Ⅰ作為抗原免疫BAIB/c小鼠,取免疫小鼠的脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融閤,經過HAT、HT選擇培養及有限稀釋法進行剋隆化,製備抗膜聯蛋白I蛋白的單剋隆抗體,用ELISA、Western blot及免疫組織化學染色法進行特性鑒定.結果:穫得5株分泌抗膜聯蛋白Ⅰ mAb的雜交瘤細胞,分彆命名為1A8、1D2、1E2、4E7和5G3,所產抗體,均為IgGl亞型,輕鏈均為κ鏈,親和力為(2.3～3.03)×108L/mol.經Western blot證實穫得的mAbs可以特異性識彆膜聯蛋白Ⅰ抗原;免疫組織化學染色結果也顯示這些mAbs可以特異識彆腫瘤組織中的膜聯蛋白Ⅰ.結論:成功地穫得瞭5株抗膜聯蛋白I的mAbs,為進一步在腫瘤診斷和治療中應用膜聯蛋白Ⅰ抗體打下瞭基礎.
목적:제비항막련단백Ⅰ단극륭항체(mAb),대기진행특성감정,위재악성종류진단화치료중적응용타하기출.방법:구건막련단백Ⅰ기인480 bp적원핵표체재체pQE30 ANX Ⅰ,이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도단백표체,병용Ni NTA수지친화층석주순화단백.용순화적막련단백Ⅰ작위항원면역BAIB/c소서,취면역소서적비세포여SP2/0골수류세포융합,경과HAT、HT선택배양급유한희석법진행극륭화,제비항막련단백I단백적단극륭항체,용ELISA、Western blot급면역조직화학염색법진행특성감정.결과:획득5주분비항막련단백Ⅰ mAb적잡교류세포,분별명명위1A8、1D2、1E2、4E7화5G3,소산항체,균위IgGl아형,경련균위κ련,친화력위(2.3～3.03)×108L/mol.경Western blot증실획득적mAbs가이특이성식별막련단백Ⅰ항원;면역조직화학염색결과야현시저사mAbs가이특이식별종류조직중적막련단백Ⅰ.결론:성공지획득료5주항막련단백I적mAbs,위진일보재종류진단화치료중응용막련단백Ⅰ항체타하료기출.
