中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2006年
11期
869-875
,共7页
李良维%刘兢%姚雪彪%程联胜
李良維%劉兢%姚雪彪%程聯勝
리량유%류긍%요설표%정련성
Hec1%动粒%启动子%活化转录因子4%cAMP应答元件结合蛋白
Hec1%動粒%啟動子%活化轉錄因子4%cAMP應答元件結閤蛋白
Hec1%동립%계동자%활화전록인자4%cAMP응답원건결합단백
细胞的分裂是一个严格调控,高度有序的过程.为了将复制后的染色体均匀、准确地传递给两个子细胞,细胞在分裂中后期受到纺锤体检验点的严格监控.Hec1定位于动粒,是纺锤体检验点调控的关键蛋白之一,它通过螺旋-螺旋结构域与其他动粒蛋白相互作用调节姐妹染色体的精确分离.为研究Hec1转录水平的调控机理,采用BLAST工具,从GenBank中搜索到了人Hec1基因上游的序列,并利用在线工具http://mbs.cbrc.jp/research/db/TFSEARCH.html提供的转录因子结合位点搜索引擎,对其5'启动子调节区段进行了分析.分析结果表明:在Hec1基因上游-200～-1序列内,存在E2F、ATF4和cAMP应答元件结合蛋白(CREB)等转录因子调控元件.在结构分析的基础上,提取HeLa细胞基因组DNA,用PCR方法克隆了Hec1基因启动子,并构建了多个含启动子不同区段的pGL3荧光素酶报告基因表达质粒.瞬时转染HeLa细胞后的结果表明,-70～-63以及-155～-144之间的启动子区对维持荧光素酶活性最为关键.凝胶迁移实验证明,这两个区段分别能够和转录因子CREB以及ATF4结合.随后,采用野生型的以及含有133位磷酸化位点突变的CREB转染HeLa细胞,通过荧光定量PCR实验发现,Hec1的表达水平分别出现明显上升和下降.该结果表明,Hec1表达的调控是通过CREB的活化来完成的.
細胞的分裂是一箇嚴格調控,高度有序的過程.為瞭將複製後的染色體均勻、準確地傳遞給兩箇子細胞,細胞在分裂中後期受到紡錘體檢驗點的嚴格鑑控.Hec1定位于動粒,是紡錘體檢驗點調控的關鍵蛋白之一,它通過螺鏇-螺鏇結構域與其他動粒蛋白相互作用調節姐妹染色體的精確分離.為研究Hec1轉錄水平的調控機理,採用BLAST工具,從GenBank中搜索到瞭人Hec1基因上遊的序列,併利用在線工具http://mbs.cbrc.jp/research/db/TFSEARCH.html提供的轉錄因子結閤位點搜索引擎,對其5'啟動子調節區段進行瞭分析.分析結果錶明:在Hec1基因上遊-200～-1序列內,存在E2F、ATF4和cAMP應答元件結閤蛋白(CREB)等轉錄因子調控元件.在結構分析的基礎上,提取HeLa細胞基因組DNA,用PCR方法剋隆瞭Hec1基因啟動子,併構建瞭多箇含啟動子不同區段的pGL3熒光素酶報告基因錶達質粒.瞬時轉染HeLa細胞後的結果錶明,-70～-63以及-155～-144之間的啟動子區對維持熒光素酶活性最為關鍵.凝膠遷移實驗證明,這兩箇區段分彆能夠和轉錄因子CREB以及ATF4結閤.隨後,採用野生型的以及含有133位燐痠化位點突變的CREB轉染HeLa細胞,通過熒光定量PCR實驗髮現,Hec1的錶達水平分彆齣現明顯上升和下降.該結果錶明,Hec1錶達的調控是通過CREB的活化來完成的.
세포적분렬시일개엄격조공,고도유서적과정.위료장복제후적염색체균균、준학지전체급량개자세포,세포재분렬중후기수도방추체검험점적엄격감공.Hec1정위우동립,시방추체검험점조공적관건단백지일,타통과라선-라선결구역여기타동립단백상호작용조절저매염색체적정학분리.위연구Hec1전록수평적조공궤리,채용BLAST공구,종GenBank중수색도료인Hec1기인상유적서렬,병이용재선공구http://mbs.cbrc.jp/research/db/TFSEARCH.html제공적전록인자결합위점수색인경,대기5'계동자조절구단진행료분석.분석결과표명:재Hec1기인상유-200～-1서렬내,존재E2F、ATF4화cAMP응답원건결합단백(CREB)등전록인자조공원건.재결구분석적기출상,제취HeLa세포기인조DNA,용PCR방법극륭료Hec1기인계동자,병구건료다개함계동자불동구단적pGL3형광소매보고기인표체질립.순시전염HeLa세포후적결과표명,-70～-63이급-155～-144지간적계동자구대유지형광소매활성최위관건.응효천이실험증명,저량개구단분별능구화전록인자CREB이급ATF4결합.수후,채용야생형적이급함유133위린산화위점돌변적CREB전염HeLa세포,통과형광정량PCR실험발현,Hec1적표체수평분별출현명현상승화하강.해결과표명,Hec1표체적조공시통과CREB적활화래완성적.
