CAJ | 학술논문

目的:观察T型钙通道阻断剂镍对胚胎神经干细胞的调节,分析T型钙通道在神经干细胞增殖和分化中的作用.方法:实验于2004-08/2006-01在南方医科大学神经生物学教研室完成.选取清洁级成年雌性Wistar孕鼠1只,分离大脑半球,制成单细胞悬液,利用无血清培养技术,在添加碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27 supplement的DMEM/F12培养基中培养胚胎神经干细胞,当神经球增大至50～200个细胞/球时,即可传代.取第3代胚胎神经干细胞,在培养基中分别加入0,0.25,0.5,1.0mmol/L的氯化镍,以BrdU免疫荧光、四唑盐、流式细胞仪检测细胞增殖指数以及DCX和S-100β阳性细胞数.结果:①神经干细胞体外培养的鉴定:取原代和传代培养的细胞进行免疫荧光鉴定,发现均有细胞表达nestin抗原.传至第3代时,其阳性比例可达99%.②诱导分化及鉴定:分化2 d后,镜下观察细胞长出突起,已初步具有神经元和胶质细胞形态.免疫荧光染色显示分化细胞呈现DCX和S-100β阳性.③细胞增殖检测结果:加入0.25,0.5,1.0 mmol/L的氯化镍处理细胞,MTT检测其吸光度值分别为未加入氯化镍的62.09%,48.20%,34.85%,呈浓度依赖性降低(P均＜0.001);免疫荧光检测BrdU阳性细胞数分别为未加入氯化镍的85.75%,74.25%,57.01%(P＜0.05).流式细胞仪检测加入0.5 mmol/L氯化镍的单细胞悬液其增殖指数显著高于未加入氯化镍的单细胞悬液(66.11%,1.016%,P＜0.001).④镍对细胞分化的影响:单细胞悬液加入0.25,0.5,1.0 mmol/L氯化镍后,BrdU阳性细胞数量减少(P均＜0.001);DCX阳性细胞数分别比未加入氯化镍的单细胞悬液增加23%,52%,58%(P＜0.05或0.01);S-100β阳性细胞数增加85%,105%,110%(P＜0.05或0.01).结论:T型钙通道阻断剂镍可抑制胚胎神经干细胞的分裂增殖,促进其分化,提示T型钙通道可能参与胚胎神经干细胞增殖分化的调节.
목적:관찰T형개통도조단제얼대배태신경간세포적조절,분석T형개통도재신경간세포증식화분화중적작용.방법:실험우2004-08/2006-01재남방의과대학신경생물학교연실완성.선취청길급성년자성Wistar잉서1지,분리대뇌반구,제성단세포현액,이용무혈청배양기술,재첨가감성성섬유세포생장인자、표피생장인자、B27 supplement적DMEM/F12배양기중배양배태신경간세포,당신경구증대지50～200개세포/구시,즉가전대.취제3대배태신경간세포,재배양기중분별가입0,0.25,0.5,1.0mmol/L적록화얼,이BrdU면역형광、사서염、류식세포의검측세포증식지수이급DCX화S-100β양성세포수.결과:①신경간세포체외배양적감정:취원대화전대배양적세포진행면역형광감정,발현균유세포표체nestin항원.전지제3대시,기양성비례가체99%.②유도분화급감정:분화2 d후,경하관찰세포장출돌기,이초보구유신경원화효질세포형태.면역형광염색현시분화세포정현DCX화S-100β양성.③세포증식검측결과:가입0.25,0.5,1.0 mmol/L적록화얼처리세포,MTT검측기흡광도치분별위미가입록화얼적62.09%,48.20%,34.85%,정농도의뢰성강저(P균＜0.001);면역형광검측BrdU양성세포수분별위미가입록화얼적85.75%,74.25%,57.01%(P＜0.05).류식세포의검측가입0.5 mmol/L록화얼적단세포현액기증식지수현저고우미가입록화얼적단세포현액(66.11%,1.016%,P＜0.001).④얼대세포분화적영향:단세포현액가입0.25,0.5,1.0 mmol/L록화얼후,BrdU양성세포수량감소(P균＜0.001);DCX양성세포수분별비미가입록화얼적단세포현액증가23%,52%,58%(P＜0.05혹0.01);S-100β양성세포수증가85%,105%,110%(P＜0.05혹0.01).결론:T형개통도조단제얼가억제배태신경간세포적분렬증식,촉진기분화,제시T형개통도가능삼여배태신경간세포증식분화적조절.