CAJ | 학술논문

目的:探讨脱细胞关节软骨支架材料的制备方法,制备软骨理想的组织工程支架材料.方法:实验于2005-12/2006-08在兰州大学第二医院骨科研究所实验室完成.实验方法:利用冷冻干燥、化学去污剂等方法制备脱细胞的兔关节软骨.在无菌状态下取青紫蓝兔的新鲜兔关节软骨,剪成3.5 mm×3.5 mm,厚度0.2～2.0 mm,在冷冻干燥器中冻干12 h.在10 g/L Triton X-100、Tris-HCI液内加入蛋白酶抑制剂-苯甲基黄酰氟,持续振荡48 h后标本以双蒸馏水连续冲洗后置于DNase I酶和RNase A酶混合液中消化.置于10 g/L Triton X-100、Tris-HCI液中洗脱.实验评估:①大体观察:肉眼观察脱细胞后关节软骨的外观形态.②组织学观察:将制备的脱细胞关节软骨行石蜡包埋切片,行苏木精-伊红染色、Massion三色染色并在光镜下观察.③扫描电镜观察:将制备的脱细胞关节软骨以戊二醛-锇酸双固定后,行扫描电镜观察.结果:①脱细胞后关节软骨外观形态:肉眼下可见正常关节软骨呈白色或淡黄色,脱细胞后关节软骨色呈灰白,半透明状,无光泽,外形与软骨相似并且仍维持了关节软骨的结构.②脱细胞后关节软骨的组织学变化:苏木精-伊红染色显示,软骨细胞消失,软骨巢分辨不清,在巢内没有蓝染的核物质,核细胞碎屑,只有红染为残留的细胞外基质.Massion三色染色显示,脱细胞后关节软骨内主要含有胶原纤维.③脱细胞后关节软骨的超微结构:扫描电镜下显示,脱细胞后关节软骨陷窝呈蜂窝状,未见到残余的细胞核、细胞器,残余的空穴高低不平.结论:经冷冻干燥、化学去污剂等方法可完整去除软骨中的细胞成分,保留胶原纤维等细胞外基质.
목적:탐토탈세포관절연골지가재료적제비방법,제비연골이상적조직공정지가재료.방법:실험우2005-12/2006-08재란주대학제이의원골과연구소실험실완성.실험방법:이용냉동간조、화학거오제등방법제비탈세포적토관절연골.재무균상태하취청자람토적신선토관절연골,전성3.5 mm×3.5 mm,후도0.2～2.0 mm,재냉동간조기중동간12 h.재10 g/L Triton X-100、Tris-HCI액내가입단백매억제제-분갑기황선불,지속진탕48 h후표본이쌍증류수련속충세후치우DNase I매화RNase A매혼합액중소화.치우10 g/L Triton X-100、Tris-HCI액중세탈.실험평고:①대체관찰:육안관찰탈세포후관절연골적외관형태.②조직학관찰:장제비적탈세포관절연골행석사포매절편,행소목정-이홍염색、Massion삼색염색병재광경하관찰.③소묘전경관찰:장제비적탈세포관절연골이무이철-철산쌍고정후,행소묘전경관찰.결과:①탈세포후관절연골외관형태:육안하가견정상관절연골정백색혹담황색,탈세포후관절연골색정회백,반투명상,무광택,외형여연골상사병차잉유지료관절연골적결구.②탈세포후관절연골적조직학변화:소목정-이홍염색현시,연골세포소실,연골소분변불청,재소내몰유람염적핵물질,핵세포쇄설,지유홍염위잔류적세포외기질.Massion삼색염색현시,탈세포후관절연골내주요함유효원섬유.③탈세포후관절연골적초미결구:소묘전경하현시,탈세포후관절연골함와정봉와상,미견도잔여적세포핵、세포기,잔여적공혈고저불평.결론:경냉동간조、화학거오제등방법가완정거제연골중적세포성분,보류효원섬유등세포외기질.