吉林农业大学学报
吉林農業大學學報
길임농업대학학보
JOURNAL OF JILIN AGRICUL TURAL UNIVERSITY
2009年
3期
330-333
,共4页
孟庆峰%梁艳婷%肖成蕊%宋战昀%钱爱东%王伟利
孟慶峰%樑豔婷%肖成蕊%宋戰昀%錢愛東%王偉利
맹경봉%량염정%초성예%송전윤%전애동%왕위리
水貂阿留申病毒%VP2基因%克隆表达%重组蛋白
水貂阿留申病毒%VP2基因%剋隆錶達%重組蛋白
수초아류신병독%VP2기인%극륭표체%중조단백
根据GenBank中已发表的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因核苷酸序列设计合成1对特异引物,利用PCR方法扩增ADV国内分离株部分VP2基因片段,将其克隆到原核表达载体pET-28a中.经酶切、PCR扩增和测序分析证实其已正确插入到表达载体中,构建了原核表达载体pET-28a-VP2.阳性重组质粒转化宿主菌BL21,用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和免疫印迹分析.结果表明蛋白获得了表达,表达产物的分子质量为21 kD,与理论推测的分子质量一致;在终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导下,5 h时表达量达到高峰;Western blot分析表明表达蛋白能被兔抗水貂抗体所识别,具有相应的抗原性.
根據GenBank中已髮錶的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因覈苷痠序列設計閤成1對特異引物,利用PCR方法擴增ADV國內分離株部分VP2基因片段,將其剋隆到原覈錶達載體pET-28a中.經酶切、PCR擴增和測序分析證實其已正確插入到錶達載體中,構建瞭原覈錶達載體pET-28a-VP2.暘性重組質粒轉化宿主菌BL21,用IPTG進行誘導錶達,對錶達產物進行SDS-PAGE和免疫印跡分析.結果錶明蛋白穫得瞭錶達,錶達產物的分子質量為21 kD,與理論推測的分子質量一緻;在終濃度為1 mmol/L的IPTG誘導下,5 h時錶達量達到高峰;Western blot分析錶明錶達蛋白能被兔抗水貂抗體所識彆,具有相應的抗原性.
근거GenBank중이발표적수초아류신병독(ADV)VP2기인핵감산서렬설계합성1대특이인물,이용PCR방법확증ADV국내분리주부분VP2기인편단,장기극륭도원핵표체재체pET-28a중.경매절、PCR확증화측서분석증실기이정학삽입도표체재체중,구건료원핵표체재체pET-28a-VP2.양성중조질립전화숙주균BL21,용IPTG진행유도표체,대표체산물진행SDS-PAGE화면역인적분석.결과표명단백획득료표체,표체산물적분자질량위21 kD,여이론추측적분자질량일치;재종농도위1 mmol/L적IPTG유도하,5 h시표체량체도고봉;Western blot분석표명표체단백능피토항수초항체소식별,구유상응적항원성.
