中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2010年
4期
364-366
,共3页
戴佳琳%黄江%廖兴江%郎书源
戴佳琳%黃江%廖興江%郎書源
대가림%황강%료흥강%랑서원
牛带绦虫%全长cDNA%质粒文库%表达序列标签(EST)
牛帶縚蟲%全長cDNA%質粒文庫%錶達序列標籤(EST)
우대조충%전장cDNA%질립문고%표체서렬표첨(EST)
目的 构建牛带绦虫(Taenia saginata)成虫全长cDNA质粒文库,为寻找更多有效的牛带绦虫病疫苗候选抗原分子及对三种主要人体带绦虫的功能基因对比研究奠定基础.方法 提取牛带绦虫成虫mRNA;进行反转录合成双链cDNA.PCR产物经蛋白酶K消化、纯化后,进行Sfi I酶切;用CHROMA SPIN-400柱将酶切产物进行分级分离,经1.1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,并与改造载体pBluescript II SK连接,将连接产物涂板,测定文库的滴度;用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建文库质量.随机挑选质粒文库转化的阳性重组克隆,进行较大规模的5'端测序,归并UniGene.结果 测定文库的滴度为1 016个菌落/μL,共测1 023个克隆,对这些序列进行UniGene归并,得到419条unigene.结论 已成功获得高质量的牛带绦虫成虫全长cDNA表达文库.
目的 構建牛帶縚蟲(Taenia saginata)成蟲全長cDNA質粒文庫,為尋找更多有效的牛帶縚蟲病疫苗候選抗原分子及對三種主要人體帶縚蟲的功能基因對比研究奠定基礎.方法 提取牛帶縚蟲成蟲mRNA;進行反轉錄閤成雙鏈cDNA.PCR產物經蛋白酶K消化、純化後,進行Sfi I酶切;用CHROMA SPIN-400柱將酶切產物進行分級分離,經1.1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定,併與改造載體pBluescript II SK連接,將連接產物塗闆,測定文庫的滴度;用載體剋隆位點兩耑的引物進行PCR擴增,以檢測所構建文庫質量.隨機挑選質粒文庫轉化的暘性重組剋隆,進行較大規模的5'耑測序,歸併UniGene.結果 測定文庫的滴度為1 016箇菌落/μL,共測1 023箇剋隆,對這些序列進行UniGene歸併,得到419條unigene.結論 已成功穫得高質量的牛帶縚蟲成蟲全長cDNA錶達文庫.
목적 구건우대조충(Taenia saginata)성충전장cDNA질립문고,위심조경다유효적우대조충병역묘후선항원분자급대삼충주요인체대조충적공능기인대비연구전정기출.방법 제취우대조충성충mRNA;진행반전록합성쌍련cDNA.PCR산물경단백매K소화、순화후,진행Sfi I매절;용CHROMA SPIN-400주장매절산물진행분급분리,경1.1%경지당응효전영감정,병여개조재체pBluescript II SK련접,장련접산물도판,측정문고적적도;용재체극륭위점량단적인물진행PCR확증,이검측소구건문고질량.수궤도선질립문고전화적양성중조극륭,진행교대규모적5'단측서,귀병UniGene.결과 측정문고적적도위1 016개균락/μL,공측1 023개극륭,대저사서렬진행UniGene귀병,득도419조unigene.결론 이성공획득고질량적우대조충성충전장cDNA표체문고.
