CAJ | 학술논문

目的利用四环素调控复制缺陷性单纯疱疹病毒I型重组载体(QR9TO-LacZ)感染体外原代培养的大鼠皮层神经元,探讨其介导半乳糖苷酶(LacZ)基因的表达情况及基因调控效能;并检测该载体对神经元活力的影响.方法用RUL9-8细胞系扩增QR9TO-LacZ病毒株,收集后采用噬斑法测定病毒滴度;体外原代培养大鼠皮层神经元.将培养的原代神经元分为强力霉素(DOX)组和对照组.两组细胞均用QR9TO-LacZ转染,强力霉素组加入四环素衍生物强力霉素(0.5 μg/ml),对照组加入等剂量空白对照液.同时根据感染复数(MOI),即MOI=3、5、10、30 PFU/cell,将两组培养细胞进一步分为亚组.病毒转染48h后行X- gal 染色;光镜下观察神经元形态,随机选取10 个高倍镜视野(×400),计算每高倍镜视野中平均蓝染细胞率,比较不同MOI病毒感染神经元的效率.采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测感染病毒48 h(MOI同上)后神经元的活性.结果在含有DOX的培养环境中,不同MOI亚组(3、5、10、30 PFU/cell)QR9TO-LacZ感染神经元出现蓝染细胞百分比分别为5.35%±0.84%、10.64%±1.92%、19.73%±2.87%、34.41%±2.58%;在无DOX的培养环境中,各亚组均未观察到蓝染细胞.上述MOI感染的神经元细胞存活率分别为:90.24%±8.16%、88.00%±5.69%、83.95%±3.82%、78.90%±5.49%.结论 QR9TO-LacZ载体能有效地将目的基因导入原代培养神经元中并表达;目的基因表达的开启受强力霉素调控;QR9TO-LacZ对体外原代培养神经元毒性较低.
목적 이용사배소조공복제결함성단순포진병독I형중조재체(QR9TO-LacZ)감염체외원대배양적대서피층신경원,탐토기개도반유당감매(LacZ)기인적표체정황급기인조공효능;병검측해재체대신경원활력적영향.방법 용RUL9-8세포계확증QR9TO-LacZ병독주,수집후채용서반법측정병독적도;체외원대배양대서피층신경원.장배양적원대신경원분위강력매소(DOX)조화대조조.량조세포균용QR9TO-LacZ전염,강력매소조가입사배소연생물강력매소(0.5 μg/ml),대조조가입등제량공백대조액.동시근거감염복수(MOI),즉MOI=3、5、10、30 PFU/cell,장량조배양세포진일보분위아조.병독전염48h후행X- gal 염색;광경하관찰신경원형태,수궤선취10 개고배경시야(×400),계산매고배경시야중평균람염세포솔,비교불동MOI병독감염신경원적효솔.채용사갑기우담서염미량매반응비색법(MTT법)검측감염병독48 h(MOI동상)후신경원적활성.결과재함유DOX적배양배경중,불동MOI아조(3、5、10、30 PFU/cell)QR9TO-LacZ감염신경원출현람염세포백분비분별위5.35%±0.84%、10.64%±1.92%、19.73%±2.87%、34.41%±2.58%;재무DOX적배양배경중,각아조균미관찰도람염세포.상술MOI감염적신경원세포존활솔분별위:90.24%±8.16%、88.00%±5.69%、83.95%±3.82%、78.90%±5.49%.결론 QR9TO-LacZ재체능유효지장목적 기인도입원대배양신경원중병표체;목적 기인표체적개계수강력매소조공;QR9TO-LacZ대체외원대배양신경원독성교저.