CAJ | 학술논문

目的观察缓激肽(BK)对体外培养的人角质形成细胞(HKC)增殖、凋亡和分化的影响并探讨其机制. 方法以1×10-4～1×10-9 mol/L BK作用于体外培养的HKC,采用噻唑蓝法、台盼蓝染色法观察到1×10-4 mol/L BK抑制作用最强,以此浓度BK进行余下实验.当HKC达对数生长期后,一部分加入1×10-4mol/L BK作为实验组,另一部分不加BK作为对照组,分别培养24、48 h后采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况及细胞周期,用链霉亲和素-生物素复合物(SABC)免疫细胞化学法检测HKC分化标志物角蛋白10(K10)及内披蛋白的表达情况.用含1×10-4mol/L BK的无血清培养基KC-SFM培养HKC作为实验组,对照组细胞仅加KC-SFM,分别用激光扫描共聚焦显微镜结合钙荧光探针Fluo-3/AM 技术检测细胞内游离Ca2+浓度即[Ca2+]i的变化. 结果与对照组比较,实验组G0/G1期细胞比例相对上升34.57%,S期相对下降58.91%,其细胞早期凋亡率为15.34%,明显高于对照组(5.60%,P<0.05).实验组HKC K10阳性细胞百分比为2.20%,明显低于对照组(6.89%,P<0.05).BK作用3 min后实验组HKC [Ca2+]i较对照组上升163.0%,之后开始下降,5 min后接近对照组.结论高浓度BK可抑制HKC周期进程、明显促进其凋亡及诱导[Ca2+]i升高,这可能是其使HKC体外生长受抑的部分机制.BK还可抑制表皮再生和HKC分化.
목적관찰완격태(BK)대체외배양적인각질형성세포(HKC)증식、조망화분화적영향병탐토기궤제. 방법이1×10-4～1×10-9 mol/L BK작용우체외배양적HKC,채용새서람법、태반람염색법관찰도1×10-4 mol/L BK억제작용최강,이차농도BK진행여하실험.당HKC체대수생장기후,일부분가입1×10-4mol/L BK작위실험조,령일부분불가BK작위대조조,분별배양24、48 h후채용류식세포의검측세포조기조망정황급세포주기,용련매친화소-생물소복합물(SABC)면역세포화학법검측HKC분화표지물각단백10(K10)급내피단백적표체정황.용함1×10-4mol/L BK적무혈청배양기KC-SFM배양HKC작위실험조,대조조세포부가KC-SFM,분별용격광소묘공취초현미경결합개형광탐침Fluo-3/AM 기술검측세포내유리Ca2+농도즉[Ca2+]i적변화. 결과여대조조비교,실험조G0/G1기세포비례상대상승34.57%,S기상대하강58.91%,기세포조기조망솔위15.34%,명현고우대조조(5.60%,P<0.05).실험조HKC K10양성세포백분비위2.20%,명현저우대조조(6.89%,P<0.05).BK작용3 min후실험조HKC [Ca2+]i교대조조상승163.0%,지후개시하강,5 min후접근대조조.결론고농도BK가억제HKC주기진정、명현촉진기조망급유도[Ca2+]i승고,저가능시기사HKC체외생장수억적부분궤제.BK환가억제표피재생화HKC분화.