微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2005年
6期
959-962
,共4页
于慧敏%史悦%田卓玲%温斐%沈忠耀
于慧敏%史悅%田卓玲%溫斐%瀋忠耀
우혜민%사열%전탁령%온비%침충요
诺卡氏菌%腈水合酶%外源表达%大肠杆菌%毕赤酵母
諾卡氏菌%腈水閤酶%外源錶達%大腸桿菌%畢赤酵母
낙잡씨균%정수합매%외원표체%대장간균%필적효모
为从基因水平上改造腈水合酶,进行了诺卡氏菌腈水合酶基因的外源表达研究.在重组大肠杆菌表达系统内,腈水合酶的α亚基几乎不能正常表达,在重组E. coli BL21(DE3) (pET32a-NHBAX)中,腈水合酶活性仅为0.04U/mg.构建重组毕赤酵母表达质粒pPIC3.5k-NHBAX,采用电穿孔转化法将其转入宿主菌P. pastoris GS115中,经过菌株培养和腈水合酶的诱导表达,筛选获得了优选菌株P. pastoris NH4.对P. pastoris NH4的细胞培养和腈水合酶的诱导表达条件进行优化,结果表明,重组腈水合酶在毕赤酵母中的表达水平可以达到0.52U/mg,但不能稳定积累.
為從基因水平上改造腈水閤酶,進行瞭諾卡氏菌腈水閤酶基因的外源錶達研究.在重組大腸桿菌錶達繫統內,腈水閤酶的α亞基幾乎不能正常錶達,在重組E. coli BL21(DE3) (pET32a-NHBAX)中,腈水閤酶活性僅為0.04U/mg.構建重組畢赤酵母錶達質粒pPIC3.5k-NHBAX,採用電穿孔轉化法將其轉入宿主菌P. pastoris GS115中,經過菌株培養和腈水閤酶的誘導錶達,篩選穫得瞭優選菌株P. pastoris NH4.對P. pastoris NH4的細胞培養和腈水閤酶的誘導錶達條件進行優化,結果錶明,重組腈水閤酶在畢赤酵母中的錶達水平可以達到0.52U/mg,但不能穩定積纍.
위종기인수평상개조정수합매,진행료낙잡씨균정수합매기인적외원표체연구.재중조대장간균표체계통내,정수합매적α아기궤호불능정상표체,재중조E. coli BL21(DE3) (pET32a-NHBAX)중,정수합매활성부위0.04U/mg.구건중조필적효모표체질립pPIC3.5k-NHBAX,채용전천공전화법장기전입숙주균P. pastoris GS115중,경과균주배양화정수합매적유도표체,사선획득료우선균주P. pastoris NH4.대P. pastoris NH4적세포배양화정수합매적유도표체조건진행우화,결과표명,중조정수합매재필적효모중적표체수평가이체도0.52U/mg,단불능은정적루.
